摘要
唾液酸(sialic acid, SA)是指一种含9个碳原子的羧基化单糖酰化衍生物。在大部分哺乳动物组织中，N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid, Neu5Ac)是SA的主要存在形式，所以通常把SA称为N-乙酰神经氨酸即Neu5Ac。研究表明SA具有非常重要的生物学作用，具有抗炎、抗病毒、抗菌和抗肿瘤等临床作用。目前在临床上已作为癌症等一些疾病的标志物。也有研究表明SA是一种脑部营养素，能促进婴幼儿大脑发育、增强学习和发育能力。母乳是婴儿营养的主要来源，其中含量丰富的SA和幼儿早期的神经系统发育、抵抗力密切相关。目前牛乳和羊乳多为母乳的替代品。因此对人体内 SA 的表达水平和婴幼儿食品（乳制品）中SA的含量进行有效监测具有重要的临床医学意义和乳产品质量把控价值。然而，实际生物样品内糖种类复杂，结构相似，且丰度较低，极易受基质效应严重干扰，这为SA的深入研究带来了挑战。为提高实际生物样品检测的准确性和快速性，急需开发一种有效的分离富集方法和准确的定量方法。主要研究内容与结果如下： 该研究建立了一套基于稳定同位素内标液相色谱串联质谱法测定乳制品中唾液酸含量的分析方法。该方法首次引入稳定同位素内标来定量乳制品中的唾液酸，采用电喷雾离子源，在负离子、多反应监测模式下进行定量分析。该研究对质谱条件、高效液相色谱流动相配比、色谱柱筛选、仪器条件优化、样品前处理以及检测波长条件均进行了方法比较优化，建立了一套高效的、准确的SA分离分析方法，并运用该方法测试了婴幼儿奶粉、酸奶等6种乳制品中的唾液酸含量。结果表明，唾液酸在0.0125~5 μg/mL范围内线性关系良好，相关系数为0.9999，加标样品的回收率为76.5%~96.4%，相对标准偏差(n=6)为0.6%~6.35%，检出限和定量限分别为0.4 ng/mL、1.6 ng/mL。该方法样品前处理简单，检测结果准确，可定量不同乳制品中唾液酸的含量。 磁性纳米材料因其优异的吸附性能越来越受到人们的重视，近年来逐渐被应用于固相萃取，可完成对复杂生物样品的分离、纯化、富集。目前，选择性富集SA 的方法有凝集素亲和法，硼酸亲和法，肼化学法和亲水作用法等。硼酸亲和富集法可以用于含顺式邻二醇化合物的选择性分离与富集，是一种强有力的分析工具。该方法具备重复性好、选择性高的优点。硼酸亲和法的基本原理是基于硼酸和顺式邻二醇之间可逆的共价络合，碱性水溶液产生相应的环状硼酸酯，在酸性环境(pH为5-7.5)中解离。然而常规硼酸对微痕量化合物 SA表现出有限的结合亲和力，近年来大量的研究者将硼酸与磁性纳米材料结合得到具有强亲和力的硼酸材料，因此本研究预制备了一种高效特异性结合SA的高密度硼酸材料。 在第二项工作中我们首先通过溶剂热法合成氨基修饰的 Fe3O4-NH2纳米粒子，然后双功能试剂戊二醛与氨基通过还原氨化偶联，将聚乙烯亚胺连接到磁性纳米粒子表面；最后利用聚乙烯亚胺（PEI）上的大量氨基与甲酰基萘硼酸通过还原胺化反应接枝硼酸基团，成功地合成了硼酸-PEI-Fe3O4。利用硼酸亲和法，样品经材料固相萃取处理之后，可直接进行LC-MS检测，该检测方法成功地应用于直接测定尿液、唾液、人血清、蛋清和果实枇杷样品中的SA含量。
NETL