摘要
红曲霉发酵产生次级代谢产物红曲色素,多项研究表明其具有降血脂、抗过敏、抗糖尿病、抗氧化、维持血管稳态、缓解胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝炎等功能活性。本研究利用实验室自行提取纯化的七种红曲色素R1、R2、O1、O2、MC、MS及AK,通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型筛选具有抗炎效果的色素,为红曲色素在抗炎药物及保健食品中的应用提供理论依据。主要方法及结果如下: 首先通过 MTT 实验确定七种色素安全用药浓度范围,并用 LPS 诱导处理RAW264.7细胞成为体外炎症模型,发现当LPS浓度为2μg/mL时诱发炎症效果最好。然后用安全浓度范围内不同色素处理RAW264.7细胞炎症模型,发现其中R1、R2、MC、MS及AK具有明显抑制NO产生能力,使用同板细胞再次筛查发现MC、MS及AK抗炎效果显著(p<0.01)且效果与阳性对照地塞米松无差异(p>0.05),但其中MS导致细胞存活率显著下降(p<0.01)。细胞划痕实验结果显示MC及MS具有较好的抑制巨噬细胞向炎症部位迁移能力。RNA-Seq分析显示,LPS上调了数种基因表达并显著上调Toll样受体信号通路中基因,而6μg/mL MC处理RAW264.7炎症模型后显著下调了炎症相关基因,并主要与JAK-STAT信号通路相关,其中IL6家族基因IL11表达量变化最为明显。利用RT-qPCR及ELISA实验进一步验证转录组分析结果显示,三种黄色素均可以显著降低IL6及IL11表达(p<0.01)并抑制细胞因子IL6及IL11分泌量(p<0.01),且其中MC组与MS及AK组存在显著差异(p<0.05)。以上均说明MC具有有效的抗炎效果,可为其开发功能食品提供依据。另外,用含有黄色素的红曲米粉制作软糖可使其具有多种生物活性。