摘要
黄精Polygonatum sibiricum Redoute是多年生草本的百合科(Liliaceae)黄精属植物，为我国重要的药食同源植物，野生资源丰富，含有多糖、皂苷等活性成分，有很高的药用价值。本文以黄精根茎为研究对象，对黄精皂苷的提取工艺、分离纯化工艺进行优化，并通过薄层色谱检测将粗分组分进行合并，在此基础上对黄精粗分总皂苷的抗氧化、降糖等生物活性进行分析，为进一步开发利用奠定基础。主要研究内容和结果如下: 1、采用超声波提取法提取黄精总皂苷，并通过正交试验进行工艺参数优化,确定黄精总皂苷的最佳提取工艺。试验结果得到超声波提取法最佳提取工艺条件为:超声功率500 W,料液比1∶20(g/mL),提取时间1.5 h,乙醇浓度75％,提取温度55℃,超声次数2次，皂苷得率7.8055±0.078mg/g。 2、将超声提取的溶液过滤后减压浓缩至浸膏状，得到无乙醇的黄精乙醇提取物。通过萃取法，减压浓缩最终得到目标化合物的正丁醇提取物。通过大孔树脂法纯化黄精总皂苷。首先对大孔树脂的吸附性进行考察，通过单因素试验确定树脂的静态吸附时间、样品上柱浓度、样品上柱流速以及样品上柱体积，研究结果显示上样浓度为0.8mg/mL,上样流速为1 mL/min,上柱体积为3 BV,上样后静态吸附3 h,大孔树脂吸附率可达90％以上。依次用4 BV的蒸馏水-30％乙醇-50％乙醇-70％乙醇-95％乙醇进行洗脱，洗脱液经薄层色谱法检测后，洗脱液被分为A、B、C、D、E、F六部分，并对不同部分进行物质检测，发现A、B部分的多糖含量丰富，说明多糖、黄酮类化合物易先被低浓度的醇溶液洗脱下来,而C、D、E、F部分为高浓度乙醇洗脱液，皂苷含量丰富。 3、对皂苷含量较高的C、D、E、F四个部分进行梯度抗氧化、降糖活性研究，对黄精总皂苷进行DPPH自由基、羟自由基、ABTS+自由基清除能力测定，抗坏血酸(VC)为阳性对照，结果显示，当浓度为2mg/mL时，皂苷含量最高的E部分对三个自由基的清除率分别为63.48％、58.83、78.66％,说明皂苷有一定的抗氧化活性，但黄精总皂苷对三个自由基的清除能力低于VC。对黄精总皂苷和阿卡波糖进行g葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制率的测定，当浓度为2 mg/mL时,阿卡波糖对两个酶的抑制率分别为99.32％和96.36％,E部分皂苷含量最高，对两种酶的抑制率高与其他部分，分别为56.45％和60.81％,进一步证实黄精皂苷有一定的降糖活性。 4、对黄精皂苷E部分进行抑菌活性分析，结果发现黄精皂苷E部分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为16.58±0.34 cm，18.58±0.25 cm,9.42±0.42 cm,抑菌圈均小于阳性对照氨苄霉素;番茄灰霉菌加入样品后，菌丝生长受到抑制，真菌菌落生长抑制率达59.74％,表明黄精皂苷E部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌等细菌和番茄灰霉菌都有一定的抑制作用。 综上表明，本实验优化了黄精皂苷的超声波法提取方法，皂苷得率可达7.8055±0.078mg/g。通过优化AB-8大孔树脂吸附性能评价大孔树脂的吸附率，充分利用树脂的吸附性，从而洗脱得到更高质量的精致总皂苷。通过体外抗氧化降糖以及抑菌活性分析，证实黄精总皂苷有一定的生物或活性。为后续黄精皂苷药理作用的研究提供一定的基础。
NETL