摘要
桑黄（Phellinus igniarius）是一种珍贵的药用真菌，早在2000多年已经被古人记录在《神农本草经》，有“森林黄金”的美称，其具有极高的药用价值。药用真菌桑黄富含多种具有药用价值的化学成分，如多糖化合物，黄酮类化合物等。黄酮类化合物是桑黄的主要的药用活性物质之一，具有多种药用功效，如抑制肿瘤生长，清除活性氧，降低血糖，抗炎抗病毒等。因此提高黄酮类化合物含量对于高品质桑黄来说意义重大。本论文研究了乙酸等外源诱导剂对桑黄黄酮类化合物含量的影响，优化其诱导条件，并在此基础上分析了外源诱导剂处理下的桑黄黄酮类化合物指纹图谱变化。主要结果如下： 为了提高桑黄菌丝液体发酵效率，为外源诱导剂筛选提供优良的发酵培养基条件。首先探究了不同碳氮源和碳氮比对桑黄菌丝的生物量和黄酮含量影响，结果表明当碳源为麦芽糖时桑黄菌丝生物量和黄酮含量最高，分别为：0.683 g，39.89 mg/g。氮源为酵母提取物时桑黄菌丝生物量和黄酮含量最高，分别为：0.632 g，39.18 mg/g。当碳氮比为40:1，黄酮含量最高：65.16 mg/g。在此基础上，从时间和浓度两个角度进行，探究了乙酸和柠檬酸对桑黄菌丝黄酮类化合物含量影响，结果表明，在实验供试范围内，当乙酸处理浓度为10 mM时，菌丝生物量和黄酮含量达到最大水平，比对照组分别增加14%，23%，乙酸处理72 h时，菌丝生物量和黄酮含量达到最大，比对照组分别提高4.2%，24.15%。在实验供试范围内，柠檬酸处理浓度为3 mM时，菌丝生物量和黄酮含量最大，比对照组分别增加10.6%，29.1%，处理48 h时，菌丝生物量和黄酮含量达到最大水平，比对照组分别提高8.9%，22.4%。结果表明乙酸和柠檬酸处理都可以在一定程度上提高桑黄菌丝生物量和黄酮含量，且具有浓度效应和时间效应。然后通过曲面响应法（RSM）优化乙酸和柠檬酸处理的最佳浓度和时间，结果发现乙酸的最佳处理条件：时间：85.56 h，浓度：9.50 mM。柠檬酸最佳处理条件：时间：69.74 h，浓度：2.77 mM。根据乙酸处理和柠檬酸处理优化结果以及实验室前期的水杨酸处理优化结果，探究了不同浓度乙酸、柠檬酸和水杨酸对桑黄子实体黄酮含量的影响。结果表明，在实验供试范围内，乙酸处理浓度为20 mM时，黄酮含量最高，比对照组增加81.71%。柠檬酸处理浓度为5 mM时，黄酮含量最高，比对照组增加49.9%。水杨酸处理浓度为400 μM时，黄酮含量最高，比对照组增加35%。结果说明适宜浓度乙酸、柠檬酸和水杨酸处理也可以显著提高桑黄子实体黄酮含量。 在上述结果基础上，进一步通过HPLC法分析了乙酸和柠檬酸处理后的菌丝体和子实体中黄酮类化合物HPLC指纹图谱。结果表明乙酸和柠檬酸处理桑黄菌丝体后，具有重要活性的黄酮类物质含量显著增加。乙酸处理后，异槲皮苷，芦丁，水仙苷，山奈酚-3-O-芸香糖苷，槲皮素，樱花素含量分别比对照组增加68.6%，75%， 65%，73%，57%，87%。柠檬酸处理后，异槲皮苷，芦丁，水仙苷，山奈酚-3-O-芸香糖苷，槲皮素，樱花素含量分别比对照组增加89.4%，37%，63%，152%，42%， 14%。同时，通过HPLC法分析了桑黄子实体黄酮指纹图谱，发现在所收集的桑黄子实体样品中，与对照组相比，乙酸、柠檬酸和水杨酸的处理能够显著提高黄酮类化合物中异槲皮苷，芦丁，水仙苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量，但是未检测到槲皮素和樱花素。 综上所述，本研究发现了乙酸、柠檬酸等外源诱导剂对桑黄黄酮类化合物的含量具有显著诱导作用。同时，通过曲面响应法优化了外源诱导剂处理桑黄菌丝最适条件，并探究了外源诱导剂对桑黄子实体黄酮含量影响。在此基础上，进一步通过HPLC法分析外源诱导剂处理后的桑黄菌丝体和子实体黄酮类化合物指纹图谱变化。本研究结果为生产具有高活性成分黄酮类化合物的优质桑黄提供参考，具有较强的应用价值。
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