摘要
目的： 本研究通过构建胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）模型，利用非靶向代谢组学研究方法，探讨MTX对CIA大鼠血清代谢的影响，进而明确MTX干预CIA大鼠的潜在调控机制。 方法： 随机将24只健康雌性 Wistar大鼠分为正常（Normal）组、模型组和MTX治疗组（n=8）。除Normal组外，其余各组构建CIA大鼠模型，MTX治疗组大鼠给予MTX 1.0 mg/kg,每周1次，治疗4周，其余两组大鼠给予生理盐水。酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELIS A）测定血清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的含量，HE染色及Masson染色观察各组大鼠关节组织学改变，非靶向气相色谱-质谱代谢组学技术筛查血清差异代谢物表达谱并进行聚类分析和KEGG富集分析，筛查出差异性代谢途径，并采用实时定量聚合酶链反应（Quantitative real time-Polymerase chain Reaction,qRT-PCR）对差异性代谢途径中的关键酶进行检测。 结果： MTX可明显改善CIA大鼠的关节炎症反应和关节炎评分（P＜0.05）,增加CIA大鼠的体重（P＜0.05）。HE和Masson染色结果显示MTX可改善CIA大鼠滑膜组织对关节软骨的侵蚀。ELISA结果显示MTX可显著降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量（P＜0.05）,提高血清中IL-4和IL-10的含量（P＜0.05）。非靶向代谢组学结果显示MTX对CIA大鼠血清中的磷酸胆碱、棕榈酸、油酸、胆碱等代谢产物有影响。KEGG通路富集分析结果显示MTX对CIA大鼠的甘油磷脂代谢和鞘脂代谢有影响。qRT-PCR结果显示MTX可下调CIA大鼠关节滑膜甘油磷脂代谢途径中关键酶Plb1、Gpcpd1、Chka、Chkb和Phospho1的表达水平（P＜0.05）,也可下调鞘脂代谢途径中关键酶Kdsr、Plpp1和Degs1的表达水平（P＜0.05）。 结论： MTX治疗类风湿关节炎的生物学机制可能与下调机体的甘油磷脂代谢和鞘脂代谢通路的代谢水平有关。
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