摘要
无花果(Ficus carica L.)属于桑科榕属温带落叶果树，其根、茎、叶、果均具有药用价值。类黄酮化合物是植物次生代谢产物，以具有抗氧化、抗衰老、抗癌等作用而闻名，在无花果叶片中的含量相当可观。但目前对无花果叶片类黄酮的研究有限，对于多品种不同生长时期的无花果叶类黄酮物质缺乏系统研究，这就造成了无花果叶无法在最大程度上得到利用。另外，前人在无花果叶抑癌活性方面鲜有研究，且有关无花果叶类黄酮抑癌活性的结构方面的文献仍是空白，这大大阻碍了无花果叶药用价值的发挥。因此，本试验以 ‘布兰瑞克’、‘波姬红’、‘玛斯义陶芬’7至11月成熟叶片为材料，从叶类黄酮的提取纯化入手，研究了不同品种不同月份的无花果叶类黄酮积累量及其抗氧化活性规律，继而探究了其抑癌活性并进行了活性成分筛选，为进一步开发利用无花果叶片的药用价值打下坚实基础。主要结果如下： 1. 利用超声波法通过响应面试验设计得到无花果叶类黄酮的最佳提取工艺为：乙醇体积分数80%，物液比1：49（g/mL），提取时间40 min，提取温度70℃，预测类黄酮提取率可达39.74 mg/g，实际提取率为39.37 mg/g，与模型预测结果相差不大，试验条件可行；在此条件下，不同品种间无花果叶片类黄酮提取率存在明显差异，其中‘布兰瑞克’最高，‘玛斯义陶芬’次之，‘波姬红’最低；不同月份间也存在明显差异，其中，‘布兰瑞克’和‘玛斯义陶芬’以10月最高，‘波姬红’以8月最高。这些结果为无花果叶片类黄酮提取及品种、时期的采收利用提供了理论依据。 2. 采用大孔树脂静态吸附解析的方法对无花果叶类黄酮进行纯化，利用单因素法得到最优纯化条件为：浓度为0.12 mg/mL，pH5的无花果叶粗类黄酮溶液40 mL吸附10 h，以浓度为70%的乙醇溶液作为洗脱剂，按照1：20 g/mL（饱和大孔树脂：洗脱体积）的比例计算所需的洗脱剂体积。以上述方法对无花果叶类黄酮纯化，纯化后的类黄酮质量分数由最初的28.4%提高到为59.3%；FeCl3还原性和DPPH清除率试验结果基本一致，‘布兰瑞克’抗氧化活性最高，‘玛斯义陶芬’次之，‘波姬红’最低。从时期上看，‘布兰瑞克’9月份抗氧化能力最高，8月份最次、‘玛斯义陶芬’10月份最高，而‘波姬红’6月份抗氧化活性最高，8月份最差；同品种间不同月份的无花果叶类黄酮含量与其还原Fe3+能力呈正相关趋势。这些结果为无花果的开发利用提供理论依据，同时为无花果叶类黄酮的抑癌研究提供了基础。 3. 不同品种不同月份的无花果叶类黄酮对癌细胞的抑制率有所不同，其中‘布兰瑞克’8月份叶片类黄酮抑癌效率最强，且对胃癌细胞SGC-7901抑制作用最好。两者具有浓度效应；在类黄酮溶液的处理下，细胞形态从梭形变为圆形，细胞密度和粘附性下降；无花果叶类黄酮诱导癌细胞凋亡，显著降低细胞线粒体膜电位水平，并将细胞分裂阻滞于S期，促细胞凋亡基因Bax和p53、细胞周期调控基因E1F2表达量显著上升，抗凋亡基因Bcl-2以及细胞周期相关基因Cyclin D1 和CDKs表达量显著下降；LC-MS/MS技术和相关分析表明，无花果叶片含有多种类黄酮类物质，其中水仙苷、异荭草苷、桑色素等可以作为抑癌活性候选物质。本研究结果为无花果叶片类黄酮在抗癌医药上的开发利用提供了理论依据。
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