摘要
目的： 本研究以川贝母为研究对象，基于博莱霉素致肺纤维化大鼠模型，观察在川贝母提取物的干预下大鼠肺组织在病理、炎性反应，纤维化等方面的表现，并分析其作用机制，以期为临床用药和肺纤维化的机制研究提供更多的依据。 方法： 1. 川贝母提取物的制备与质量检定 使用 70%乙醇作为溶剂采取热回流提取法制备川贝母提取物，通过使用酸性染料比色法结合紫外分光光度计检测川贝母提取物中总生物碱的含量，和使用高效液相色谱法（HPLC）结合蒸发光散射检测器（ELSD）检测川贝母提取物中西贝母碱、西贝碱苷、贝母素甲、贝母素乙这四种异甾体生物碱的含量来对川贝母提取物的质量进行评估。 2. 动物体内实验评估川贝母提取物对肺纤维化的作用效果 选用健康的SPF级雄性SD大鼠96只，随机分为空白组、模型组、川贝母提取物低剂量组、川贝母提取物中剂量组、川贝母提取物高剂量组、哌非尼酮组。将博莱霉素以5 mg/kg的剂量注射到气管建立肺纤维化大鼠模型，造模后第2天开始分批次灌胃处理各组大鼠7、21天。麻醉处死后记录大鼠的体重和肺重，计算各组大鼠的肺系数；将大鼠肺组织病理切片进行HE和Masson染色；使用肺组织进行羟脯氨酸和TGF-β的含量测定，并以Elisa法测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量，以Western blot法测定肺组织中α-SMA、CollagenⅠ、总NF-κB、磷酸化的NF-κΒ（p-NF-κB）和IκBα的表达量，计算p-NF-κB/NF-κB的值。对所有实验数据，以GraphPad Prism 9进行统计学处理。 3. 基于网络药理学寻找川贝母有效成分及可能参与的信号通路 利用TCMSP数据库、HERB数据库结合文献调研，收集川贝母的活性化学成分, 并将这些化学成分的结构输入到SwissADME数据库筛选出主要生物活性物质，再通过Swiss Target Prediction数据库预测川贝母的潜在靶点，最后建立药物成分-靶点网络。利用GeneCards、OMIM?和TTD数据库预测肺纤维化相关靶点，将疾病靶点与化合物靶点取交集，获得川贝母抗肺纤维化的靶点，建立蛋白-蛋白互作（PPI）网络，进行网络拓扑分析找到川贝母抗肺纤维化的核心作用靶点，进行 GO 和 KEGG富集分析，预测川贝母抗肺纤维化过程可能参与的信号通路。 结果： 1. 川贝母提取物的得率是 15.15%，川贝母提取物中总生物碱、西贝母碱、西贝碱苷、贝母素甲和贝母素乙的含量是 1.61%、0.262%、0.023%、0.10%和0.035%。 2. 病理切片显示，除空白组外，各组均呈现不同程度间质性肺病病理改变，以模型组为甚，各治疗组表现均优于模型组。川贝母提取物在大鼠血清和肺组织各项指标中均表现出治疗作用，部分指标上高剂量的川贝母提取物作用甚至优于哌非尼酮阳性药。不同给药剂量的川贝母提取物所发挥的疗效不同，均以高剂量的川贝母提取物治疗效果最好，但通常以低中剂量给药就能达到哌非尼酮的治疗效果。 3. 机制研究表明川贝母提取物可以通过抑制NF-κB信号通路的激活发挥抗肺纤维化的作用。对川贝母进行网络药理学分析，一共筛选出56个有效成分，作用于568个靶点，GO和KEGG富集分析表明多种生物富集功能和信号通路与肺纤维化相关。 结论： 川贝母提取物可以从多途径对博莱霉素所致肺纤维化大鼠产生影响，NF-κB信号通路是川贝母提取物抗肺纤维化的作用机制之一。
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