摘要
目的： 目前关于瘢痕疙瘩（Keliod，KD）的发病机制说法不一、尚不明确，造成了治疗瘢痕疙瘩的方式多种多样，但疗效确切的治疗手段非常罕见，这也导致了瘢痕疙瘩的术后复发率居高不下，因此，找到与其预后相关的蛋白是必要的。当前研究证实，上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程与瘢痕疙瘩的形成关系密切，EMT过程发生时，上皮细胞失去正常的细胞极性，伴随着细胞间连接的断裂，使得上皮细胞获得侵袭性和迁移性，最终变成间充质细胞。在此过程中，除了细胞间连接被打破，细胞骨架重新排列，还表现出间充质标志物（纤维连接蛋白，fibronectin，Fn）表达的增高，成纤维细胞的形态有长方形变为纺锤形，这一变化也使得成纤维细胞迁移与侵袭能力增强。巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）是一种内分泌免疫物质，主要起到限制或调控机体内巨噬细胞活动的作用。目前的研究证实，在某些自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病和恶性肿瘤疾病中，巨噬细胞移动抑制因子都存在异常表达，经过相关数据分析发现MIF与上述相关疾病的发生、发展甚至是预后都有相关性。有趣的是，上述疾病的生物学特征与瘢痕疙瘩较为相似；同时MIF可以通过调控相关信号通路，从而影响相关因子的表达，进而延缓细胞凋亡、促进成纤维细胞过度生长和增殖，因此MIF对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长和增殖起促进作用。本研究运用免疫组织化学染色及Elisa检测的方法，检测上皮间质转化标志蛋白Fn及MIF在正常组织和瘢痕疙瘩的表达情况，同时对瘢痕疙瘩术后患者进行随访，记录复发情况，探索Fn、MIF在瘢痕疙瘩组织中的表达情况以及与术后预后的相关性。 方法： 1.收集临床瘢痕疙瘩手术切除后标本共60例，另取正常皮肤标本30例作为对照。10%的中性福尔马林固定所取标本，常规梯度酒精脱水，石蜡包埋、切片，进行免疫组织化学染色，将切片在光学显微镜观察各组的染色情况。由两名病理科主治医师在同一显微镜下相同放大倍数下观察计数，随机选择5个视野，计算每个视野细胞中的阳性细胞百分比，取平均值。 2.收集瘢痕疙瘩患者静脉血共60例，另外收集正常求美手术术前30例静脉血作为对照。提取静脉血血清，应用Elisa试剂盒检测Fn及MIF的表达。 3.对瘢痕疙瘩术后患者进行定期（术后第1、3、6、12月）随访并记录复发情况。根据随访情况将瘢痕疙瘩患者分为两组，复发组和未复发组。将两组的Fn及MIF 的表达水平进行生存分析。 结果： 1、免疫组织化学染色结果 1.1 对照组（正常组织） 1.1.1 H-E染色光镜下组织形态：正常皮肤组织中能观察到表皮的具体层次，角质层与透明层交界处不明显，呈嗜酸性，基底细胞形状大多为柱状，角质细胞呈现为圆形或椭圆形；皮下组织纤维束排列较整齐，细胞形态呈圆形或椭圆形，未见明显结节。（见Fig.1)。 1.1.2.免疫组织化学染色结果：相对于真皮组织中的表达，MIF及Fn阳性颗粒主要集中于表皮层，相关皮肤附属器如毛囊、皮脂腺着色较深。（见Fig.3、Fig.4)。 1.2 实验组（瘢痕疙瘩组织） 1.2.1 H-E染色光镜下组织形态：瘢痕疙瘩组织中表皮层扁平、萎缩，透明层与角质层相较于正常组织较薄，呈嗜酸性；皮下组织胶原纤维纵横交错，同时伴有不同程度玻璃样变性，光镜下可见均质嗜伊红染色的叶片状结构；另外可见较粗的纤维束。（见Fig.2)。 1.2.2 免疫组织化学染色结果：MIF及Fn表达范围广，密度大，其中以真皮细胞着色程度更深，另外成纤维细胞的胞质以及微小血管周围阳性颗粒集中分布。（见Fig.3、Fig.4)。 2、Elisa结果 根据Elisa试剂盒说明书所提供的标准品浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，然后根据所测样本的OD值，在回归方程上计算出对应的MIF、Fn浓度。 2.1 瘢痕疙瘩组织中Fn的表达量为1.53±0.18（ng/ml）；MIF的表达量为1.44±0.22（ng/ml）； 2.2 正常组织中Fn的表达量为0.60±0.25（ng/ml）；MIF的表达量为0.44 ±0.10（ng/ml）。 与正常组织相比，瘢痕疙瘩组织中Fn、MIF的表达水平较高，两组比较有统计学差异（P＜0.05）。 3、随访结果 通过对瘢痕疙瘩患者术后随访，可以分为两组，复发组和未复发组，其中复发组13人，未复发组17人。 复发组MIF阳性率为90.48%，Fn阳性率为80.95%； 未复发组MIF阳性率为61.54%，Fn阳性率为53.84%。 4、统计学分析结果 4.1 MIF与Fn在实验组及对照组中的表达情况 4.1.1 通过免疫组织化学染色的方法检测MIF、Fn在实验组和对照组中的表达情况，结果发现实验组MIF阳性率为71.67%，对照组MIF阳性率为26.67%；实验组Fn阳性率为63.33%，对照组Fn阳性率为36.67%。差异具有统计学意义（P＜0.05）。 4.1.2 Elisa结果 通过测得450nm处MIF、Fn的吸光度值（OD值），根据标准曲线回归方程，计算得到MIF、Fn的表达含量（浓度）。 4.2 根据随访结果，将瘢痕疙瘩患者分为复发组和未复发组，结合免疫组化结果，通过Kaplan-Meier法进行生存分析，结果显示，Fn（-）amp;MIF （-）组患者预后最好，Fn（+）amp;MIF（+）组预后较差。 结论： 1.Fn及MIF在瘢痕疙瘩组织和正常组织中均有表达，但在瘢痕疙瘩组织中表达阳性率以及表达量更明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 2.复发组瘢痕疙瘩患者中，Fn及MIF的表达相较于未复发组表达更明显，差异有统计学差异（P＜0.05）。说明Fn及MIF可作为预测瘢痕疙瘩术后复发的生物学指标。
NETL