摘要
脂肪代谢异常是指脂类物质在体内的吸收、分解、转运等方面的异常，由多种因素综合作用发生的，如基因、饮食、药物等，会导致人类及动物多种疾病的发生。肝脏脂肪酸摄取速率大于脂肪酸氧化和输出速率时（如极低密度脂蛋白中的甘油三酯）会诱发脂肪肝，而肝脏甘油三酯蓄积则表明肝脏脂代谢通路处于不平衡状态。α-硫辛酸（Alpha lipoic acid，ALA）已成为多种维生素配方、抗衰老补充剂和宠物食品中的常见成分，具有清除自由基，螯合金属并恢复细胞内谷胱甘肽水平的功效。研究表明，α-硫辛酸可缓解肝脏脂肪沉积，而其作用机制还有待进一步研究。因此，本实验旨在揭示α-硫辛酸对大鼠生长性能、生化指标、血常规及肝脏脂代谢的影响，并探讨其调控机制。 1 日粮添加α-硫辛酸对大鼠生长性能、生化指标及血常规的影响 试验选用24只6~8周龄、体重相近的Sprague-Dawley雄性大鼠，随机分为两组，对照组（正常饮食）和α-硫辛酸组（日粮中添加0.2%的α-硫辛酸），试验期间记录体重和采食量，5周试验结束后，两组大鼠麻醉后采取全血和血浆样，称取肝脏、肾脏、脾脏和心脏重量并记录，根据器官重量与体重来分析脏器指数。结果显示，日粮添加α-硫辛酸对体重和采食量没有显著影响（Pgt;0.05），对肝脏、脾脏、心脏的肾脏的净重也没有显著影响（Pgt;0.05），但硫辛酸极显著提高了肝脏指数（Plt;0.05），对其他脏器指数没有显著影响。血浆生化结果显示日粮添加α-硫辛酸可显著提高血浆中谷草转氨酶谷草氨酸（AST）和谷丙转氨酶（ALT）的含量（Plt;0.05），但却显著降低AST/ALT的比值（Plt;0.05）；同时发现α-硫辛酸组血浆甘油三酯（TG）的含量较对照组显著降低（P lt; 0.05）；对其他生化指标如总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、葡萄糖（GLU）无显著影响（Pgt;0.05）。血常规分析结果显示α-硫辛酸对红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度变异系数（RDW-CV）、红细胞分布密度（RDW-SD）、血小板计数（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、血小板压积（PCT）、白细胞（WBC）、嗜中性粒细胞（Neu）、淋巴细胞（Lym）、单核细胞（Mon）以及嗜酸性粒细胞（Eos）均无显著性影响。 2 日粮添加α-硫辛酸对大鼠肝脏脂代谢的影响 运用油红染色、实时荧光定量PCR以及Western Blot等技术手段，检测对照组和实验组大鼠肝脏脂质含量变化，以及脂质合成、转运及释放相关基因和蛋白水平变化。油红染色结果显示日粮添加α-硫辛酸可显著降低肝脏脂滴数量，与油红结果相对应，肝脏TG含量同样发现α-硫辛酸添加组的肝脏TG含量低于对照组。PCR 结果显示，脂质相关基因硬脂酰辅酶 A 去饱和酶（ stearoyl-CoA desaturase,SCD）基因表达量显著降低（Plt;0.05），固醇调节元件结合蛋白-1（Sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1 ）和脂肪组织甘油三酯水解酶（adipose triglyeeride lipase,ATGL）基因表达量显著上调（Plt;0.05）。Western Blot蛋白相对定量分析发现脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase，FASN）和脂肪酸结合蛋白1（Fatty acid binding protein，FABP1）的蛋白表达量显著下调（Plt;0.05），而磷酸化激素敏感性甘油三酯脂肪酶（Phosphorylation-hormone-sensitive lipase, p-HSL）的表达量显著上调（Plt;0.05）。 3 日粮添加α-硫辛酸对大鼠肝脏脂代谢的影响机制 MicroRNAs（MiRNAs）是一种小的非编码RNA，通过切割或翻译抑制目标mRNAs，参与多种机体代谢途径。利用 small-RNA 测序分析对大鼠肝脏差异miRNA进项筛选，测序结果显示，日粮添加α-硫辛酸显著上调8个miRNA（rno-miR-200a-5P、rno-miR-3548、rno-miR-429、rno-miR-29c-5p、rno-miR-27a-3p、rno-miR-182、rno-miR-150-5p、rno-miR-21-5p）（Plt;0.05），显著下调11个miRNA （rno-miR-582-3P、rno-miR-451-5p、rno-miR-9a-3p、rno-miR-9a-5p、rno-miR-7b、rno-miR-124-3p、rno-miR-9b-3p、rno-miR582-5p、rno-miR-190b-5p、rno-miR-28-3p、rno-miR-802-5p）（Plt;0.05）。随即筛选出rno-miR-3548、rno-miR-182以及rno-miR-27a-3p与Fasn的3’UTR有结合位点。运用双荧光素酶报告基因将Fasn的 3’UTR 与上述三种 miRNA 的类似物（mimic）进行共转染，结果发现 miR-3548 mimic可显著降低萤火虫荧光强度，突变miR-3548与Fasn 3’UTR的结合位点之后发现，荧光强度的降低得到了显著缓解。 综上所述，日粮添加α-硫辛酸通过下调FASN和FABP1蛋白表达，并在上调p-HSL 表达来减轻肝脏脂质沉积。同时发现 FASN 的表达抑制部分是通过增加大鼠肝脏中miR-3548的水平来介导的。
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