摘要
目的：通过体内与体外实验，探讨褪黑素是否可以通过抑制NF-κB通路减轻急性脊髓损伤后神经细胞焦亡的发生。 方法：（1）体内实验：选择雌性SD大鼠30只，大鼠体重维持在200g左右，在进行造模前将其随机分为三组，Sham组，SCI组，SCI+MT组，每组10只大鼠。脊髓损伤模型采用椎板切除后直接打击脊髓组织建立，建模成功后连续腹腔注射给药7天，在1-7天连续进行BBB评分，然后在第8天用过量麻醉的方法处死大鼠提取脊髓组织后，沿着脊髓组织纵轴进行切片，分别进行组织化学染色，观察脊髓组织的结构和细胞变化，通过免疫荧光实验以及蛋白印记实验对相关蛋白的表达水平进行检测。（2）体外实验：用过氧化氢(H2O2)刺激大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞，模拟脊髓损伤的体外实验。将细胞瓶中密度均匀的PC12细胞随机分为正常组，H2O2组，褪黑素+H2O2组三组，然后观察H2O2干预前后以及褪黑素保护后的细胞形态变化，通过WB以及免疫荧光进行相关蛋白表达情况的检测。 结果：（1）通过大鼠SCI实验表明，脊髓损伤后细胞焦亡相关蛋白较正常组表达明显增高，脊髓组织大量破坏，神经细胞大量死亡；褪黑素干预治疗后， NF-κB通路得到明显抑制，细胞焦亡相关蛋白表达下降，炎症相关因子IL-18， IL-1β合成以及分泌都减少，脊髓损伤区域也得到不同程度的减少，大鼠的运动功能也得到了好转。（2）H2O2干预的PC12细胞所形成的体外模型中，显示H2O2干预后的细胞形态发生明显变化，细胞发生变性坏死，褪黑素干预保护后，H2O2对PC12细胞的损害情况明显减轻，免疫荧光以及WB实验都证实，H2O2干预后PC12细胞发生了细胞焦亡的情况，与之相关的蛋白表达都显著增加，而通过褪黑素的保护后，细胞焦亡的情况有所减轻，蛋白表达明显减少。 结论：体内与体外实验发现，急性脊髓损伤发生后，NF-κB通路被激活，细胞焦亡相关炎症因子释放增加，神经细胞发生细胞焦亡反应。褪黑素干预后NF-κB通路得到抑制，炎症因子释放明显减少，细胞焦亡反应减轻，炎症反应减轻，脊髓损伤得到好转。
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