摘要
目的： 在HaCaT细胞中通过TNF-α诱导银屑病细胞模型，探究6-OHDA对银屑病细胞模型增殖、细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响并探究6-OHDA调控银屑病细胞功能学变化的作用机制。 方法： 1、在HaCaT细胞中使用TNF-α(10、25、50、100μM)诱导银屑病细胞模型，(1)CCK8检测细胞增殖活性，筛选最佳建模浓度。(2)RT-PCR检测银屑病细胞模型中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17的表达变化。(3)流式细胞术检测银屑病细胞模型中细胞凋亡变化。(4)流式细胞术检测银屑病细胞模型中细胞周期变化。(5)western blot检测银屑病细胞模型中WNT信号通路蛋白变化。2、使用6-OHDA(10、25、50、100μM)干预银屑病细胞模型，(1)CCK8检测细胞增殖活性,筛选最佳药物浓度。(2)RT-PCR检测银屑病细胞模型中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17的表达变化。(3)流式细胞术检测干预后细胞凋亡变化。(4)流式细胞术检测干预后细胞周期变化。(5)western blot检测干预后细胞模型中WNT信号通路蛋白变化。 结果： 1、使用 TNF-α(10、25、50、100μM)作用于 HaCaT 细胞后，(1)CCK8 结果显示:相比正常细胞组，添加不同浓度的TNF-α后均能促进细胞增殖活性(p＜0.001),其中50μM作用浓度下促进效果最为显著，后续将使用50μM作为建模浓度。(2)RT-PCR检测结果显示:相比正常细胞组，银屑病细胞模型中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17表达均显著升高(p＜0.01)。(3)细胞凋亡检测结果显示:相比正常细胞组，银屑病细胞模型中细胞的总凋亡数量明显减少(p＜0.001)。(4)细胞周期检测结果显示:相比正常细胞组，银屑病细胞模型中细胞处于G1期细胞数量增加(p＜0.001),G2期细胞数量减少(p＜0.001),而S期细胞无明显变化。(5)western blot检测结果显示:相比正常细胞组，银屑病细胞模型中WNT信号通路被激活。2、使用6-OHDA(10、25、50、100μM)干预银屑病细胞模型后，(1)CCK8结果显示:相比银屑病细胞模型组，不同浓度的6-OHDA均能抑制细胞增殖活性(p＜0.001),其中和100μM浓度下细胞死亡细胞过多，不利于后续实验，因为选择50μM作为最佳药物干预浓度。(2)RT-PCR检测结果显示:相比银屑病细胞模型组，6-OHDA干预后银屑病细胞模型中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17表达均被显著抑制(p＜0.01)。(3)细胞凋亡检测结果显示:相比银屑病细胞模型组，6-OHDA干预后银屑病细胞模型中细胞的总凋亡数量明显增加(p＜0.001)。(4)细胞周期检测结果显示:相比银屑病细胞模型组，6-OHDA干预后银屑病细胞模型中处于G1期细胞数量减少(p＜0.001),处于S期和G2期细胞数量增加(p＜0.05)。(5)western blot检测结果显示:相比银屑病细胞模型组，银屑病细胞模型中WNT信号通路被6-OHDA阻断。 结论： 6-OHDA可以通过阻断WNT信号通路的激活而抑制银屑病细胞模型的增殖活性，促进细胞凋亡，影响细胞的周期进程，减少炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和IL-17的表达,从而调控银屑病的疾病进展。
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