摘要
目前，手术、化疗、放疗等几种方法是治疗癌症病人比较常用的方法，尽管有效,但治疗的副作用、耐药性以及随着疾病的进展而恶化的恶病质导致预后不良。因此，预防及营养干预在亚健康人群及术后调理中起到重要作用。 硒(Se)是一种重要的营养微量元素，在人和动物的各种生理过程中起着如抗氧化防御、抗癌等作用。硒与癌症密切相关，很多研究证实了它的抗癌作用。同时，Se运用于癌症传统化疗或者治疗中，在治疗的过程中都可以明显提高抗癌效果，也可以缓解身体的毒副作用和癌细胞的抗药特性。 富硒酵母是一种硒添加剂。在动物实验中没有发现对动物有致畸性和诱发变性，在一定程度上可以抑制肿瘤的生长发展。同时，富硒酵母还是优秀的功能性食品辅料,它所含有的蛋白质和维生素的量也是比较多的。由于富硒酵母的硒在生物学上比无机硒有效10～20倍，且具有增强免疫力、抗衰老的特性，因此，富硒酵母又可作为添加剂或药品被广泛使用。研究还表明富硒酵母对动物的作用效果比单独使用硒代蛋氨酸好很多。 本研究拟探讨富硒酵母抗肿瘤效果及其分子机制。首先，构建小鼠肺癌模型，用富硒酵母灌胃治疗，从肿瘤体积大小的变化、肿瘤组织H&E染色以及与肿瘤细胞坏死、凋亡等死亡相关基因和组织蛋白表达水平的变化这几个方面，探讨富硒酵母抗肿瘤的相关机制。通过比较富硒酵母和酵母在疗效和药理学方面的差异，发现了富硒酵母的抗肿瘤优势，结合分析富硒酵母对荷瘤小鼠肠道微生物群影响，总结富硒酵母抗小鼠肺癌作用可能的细胞信号转导途径。 方法: 1.通过注射LLC肺癌细胞构建小鼠肺癌模型，通过测量肿瘤大小、肿瘤组织病理切片变化，分析富硒酵母的抗肿瘤效果。 2.通过qRT-PCR及WesternBlot检测富硒酵母干预后与肿瘤发生相关基因和蛋白表达水平的变化，探讨富硒酵母抗肿瘤的分子机制。 3.通过结肠内容物16SrRNA序列测定，分析富硒酵母对荷瘤小鼠肠道菌群分布影响,发现微生物参与机体免疫作用的可能机理。 结果: 1.与肺癌模型组相比，酵母、富硒酵母的抑瘤率分别为39％、58％。肿瘤组织切片发现，富硒酵母干预后，细胞坏死及凋亡比例增加，血细胞明显减少，且富硒酵母比酵母具有更强的抗肿瘤作用。 2.与肺癌模型组相比，富硒酵母能一定程度上提高肺癌小鼠机体本身的抗氧化活性，SOD和GSH-Px酶活的活性都提高了不少，经检测得出的结果为这两种酶的活性提高的比例为25.51％、71.36％,而MDA含量则是降低，降低的比例为64.32％。富硒酵母还能提高荷瘤小鼠机体的免疫力，胸腺指数和脾脏指数也有一定程度的增加，增加的比例分为54.5％、23.1％,血清中TNF-α和IL-6的含量都有一定的提升。 3.富硒酵母能显著上调瘤组织细胞凋亡基因Caspase9、Caspase3和Bax的表达，抑制周期调控CyclinD1、CDK2基因和蛋白质的表达。 4.肠道切片显示:Tumor组小鼠的结肠壁组织有部分的增生现象，黏膜被破坏，隐窝部分丢失。Yeast和Se-Yeast处理组均能使肠道粘膜损伤得到一定的恢复，隐窝和杯状细胞的数量大幅度提高。其中，Yeast的作用效果更好。 5.富硒酵母对荷瘤小鼠肠道菌群分布影响:厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)及变形菌门(Proteobacteria)是肺癌小鼠肠道菌群的主要组成部分，其中，拟杆菌门与厚壁菌门的比值显著降低，变形菌门的丰度明显升高。而Yeast组和Se-Yeast组处理能够显著提高拟杆菌门与厚壁菌门的比值，Yeast组还能有效降低变形菌门的丰度。 6.在肠道菌群属水平比较发现:与肿瘤组相比，Se-Yeast组和Yeast处理组均能提高一定比例的益生菌丰度，其中Yeast在益生菌丰度及种类上优于Se-Yeast。另外，Se-Yeast处理组还发现了少量促炎菌。 结论: 1.富硒酵母通过抑制细胞周期、促进细胞凋亡为主的途径阻止肿瘤生长及扩散; 2.富硒酵母能增强小鼠的抗炎、抗氧化和免疫因子的释放，保护正常组织，使免疫细胞的能力得到增强，更易杀死肿瘤，增强对肿瘤细胞的抑制作用。 3.富硒酵母可以调节和维持肠道菌群的平衡，丰富肠道菌群的存在量，还能够抑制病原菌、促进益生菌（瘤胃球菌、短杆菌）来抑制肺癌的发生。 4.初步揭示了Se-Yeast诱导的ROS-TNF-α-Caspase8-线粒体依赖的细胞凋亡途径抗小鼠肺癌作用分子机制。
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