摘要
研究目的 通过对中医学古籍中关于睡眠障碍的文献进行查阅及梳理，对运动联合生慧汤防治睡眠剥夺学习大鼠记忆的医理进行分析，探讨其理论上切实可行;其次借助水迷宫、尼氏染色、WB及ELISA实验技术，从中医学及运动生理学角度出发，研究运动联合生慧汤对睡眠剥夺大鼠学习记忆、炎性小体以及炎症因子的影响，探讨运动联合生慧汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的作用机制。 研究方法 1.理论探讨:通过查阅和整理文献资料，归纳并梳理中医学对睡眠障碍病名源流、病因病机及历代医家对睡眠障碍防治观点，进一步梳理出运动联合生慧汤防治睡眠障碍的可行性，为运动联合生慧汤防治睡眠障碍提供理论基础。 2.实验研究:对50只SPF级雄性大鼠采用随机数表法，随机分为空白组（C组）、模型组（M组）、模型+运动组（ME组）、模型+生慧汤组（MS组）以及模型+运动组+生慧汤组（MES组），每组10只。ME组、MES组进行4周的跑台运动，而MS组、MES给与4周的生慧汤灌胃，采用多平台水环境法构建大鼠完全睡眠剥夺模型，将M组、ME组、MS组以及MES组进行72小时的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后采用Morris水迷宫行为学实验检测实验大鼠的学习记忆能力，采用尼氏染色观察大鼠海马区神经元形态以及尼氏小体情况，通过免疫组织化学法检测观察大鼠海马区中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白分布，借助Westernblot（免疫印迹试验）检测大鼠海马区中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平，采用ELISA法检测大鼠海马区IL-1β、IL-18表达水平。 研究结果 1.Morris水迷宫实验结果:定位巡航实验结果显示，与C组比较,M组大鼠的平台潜伏期显著增加，同时游泳总路程延长（P＜0.01）;与M组比较，ME组及MS组平台潜伏期和游泳总路程有所降低，而MES组平台潜伏期和游泳总路程明显减少（P＜0.01;P＜0.05）。空间探索实验结果显示，与C组相比较，M组大鼠穿越平台次数，停留目标象限的时间与路程都显著减少（P＜0.01）,与M组比较，ME组及MS组大鼠穿越平台次数，停留目标象限的时间及路程都有所增加，而MES组大鼠穿越平台次数，停留目标象限的时间及路程都显著增加（P＜0.01;P＜0.05）。 2.尼氏染色结果:C组大鼠海马CA3区神经元形态完整，结构清晰，胞体内可见丰富的尼氏体，并且可见大量的虎斑状尼氏体;与C组比较,M组大鼠海马CA3区神经元损伤明显，形态结构紊乱，尼氏体着色较浅,数量减少，且基本见不到虎斑状尼氏小体，其海马CA3区神经元细胞个数、尼氏体面积及累计光密度表达均显著下降（P＜0.01）;与M比较，ME、MS组以及MES组大鼠海马区神经元损伤减轻，形态结构相对完整，尼氏小体着色较深，数量增加，且可见虎斑状尼氏小体，其海马CA3区神经元细胞个数、尼氏体面积及累计光密度表达均有所增加（P＜0.01;P＜0.05）。 3.免疫组织化学法检测结果:与C组相比，M组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白平均光密度均显著增加（P＜0.01）,与M组相比，ME组和MS组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白平均光密度有所下降，而MES组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白表达显著显著下降（P＜0.01;P＜0.05）。 4.Westernblot（免疫印迹试验）检测结果:与C组相比，M组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白表达均显著增加（P＜0.01）,与M组相比，ME组和MS组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白表达有所下降，而MES组大鼠海马CA3区NLRP3、ASC以及Caspase-1蛋白表达显著减少（P＜0.01;P＜0.05）。 5.ELISA检测结果:与C组相比，M组大鼠海马CA3区IL-1β、IL-18表达均显著增加（P＜0.01）,与M组相比，ME组和MS组大鼠海马CA3区IL-1β、IL-18表达有所下降，而MES组大鼠海马CA3区IL-1β、IL-18表达显著减少（P＜0.01;P＜0.05）。 研究结论 1.睡眠障碍是由于内在正气虚损、外有邪气侵袭，合而致病。历代医家针对睡眠障碍的病因提出“内养正气以安五脏，外避邪袭以养正气,内外兼顾，杂合以治”的防治策略，因此，以外治为主的运动疗法联合以内治为主的生慧汤相合为用，是防治睡眠障碍的有效治法。 2.单独的运动或生慧汤给药干预对学习记忆均有一定的改善作用，但运动结合生慧汤的联合干预方式对改善睡眠剥夺大鼠的学习记忆能力效果更加显著。 3.运动联合生慧汤通过降低大鼠海马区炎性小体及炎症因子的表达防治睡眠剥夺大鼠学习记忆损伤。
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