摘要
人工授精技术随着养猪业的发展得到了广泛应用，然而猪精液的体外保存效果始终制约着人工授精技术的推广普及和社会化供精的快速发展。目前常用的精液保存技术有超低温冷冻保存和常温保存，而这两种保存方式各有利弊。近年来，研究发现猪精液采用4-5℃低温保存技术不仅能有效避免猪精子在超低温环境下的应激损伤，也可以抑制精子在保存过程中的代谢活动，达到延长保存时间的目的，因此这项保存技术受到越来越广泛的关注。但是，在猪精液低温保存过程中，活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)会大量富集并与质膜、精子中的蛋白甚至是DNA发生反应，造成猪精子的氧化应激，影响猪精液的保存效果。因此，我们希望通过在稀释液中添加一些抗氧化剂，减轻ROS对猪精子的氧化应激，提升低温保存过程中的猪精液品质，更好地服务于养猪生产。 本研究向猪精液稀释液中添加不同浓度和不同配伍组合的槲皮素和白藜芦醇，通过检测猪精子的活率与活力、质膜完整性、线粒体活性、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量和精子运动参数等各项指标，评价槲皮素、白藜芦醇分别单独添加和联合添加对低温保存猪精液品质的改善效果，以期筛选出稀释液中适宜的添加量，为白藜芦醇和槲皮素在猪精液低温保存中的应用提供理论依据。研究结果如下: 1.低温保存条件下，在猪精液稀释液中添加适宜浓度的槲皮素，可有效提高猪精液保存效果。槲皮素浓度≤100μmol/L的处理组提高了精清中T-AOC、SOD活力,降低了MDA含量，从而提高了精子质膜完整性、线粒体活性以及精液保存后期的精子活率、活力及VAP、VCL、VSL等运动指标。槲皮素的适宜添加浓度为50μmol/L,在精液低温保存的第7d时，精子活率为43.91％,精子活力为32.25％,质膜完整性为33.44％,线粒体活性为28.83％。高浓度的槲皮素不利于猪精液低温保存，浓度为200μmol/L处理组保存效果低于对照组，但无显著性差异。 2.低温保存条件下，在猪精液稀释液中添加适宜浓度的白藜芦醇，可有效提高猪精液保存效果。在精液保存期间，各处理组精子活率和活力、运动参数、质膜完整性、线粒体活性、T-AOC及SOD活力均高于对照组，MDA含量低于对照组。白藜芦醇的适宜添加浓度为50μmol/L,在精液低温保存的第7d时，精子活率为40.57％,活力为26.57％,质膜完整性为27.81％,线粒体活性为28.81％。 3.低温保存条件下，槲皮素和白藜芦醇对猪精液保存效果具有一定的协同作用,适宜的槲皮素和白藜芦醇添加量会进一步提高猪精液保存效果。槲皮素和白藜芦醇的添加浓度为50μmol/L+25μmol/L、25μmol/L+50μmol/L、25μmol/L+25μmol/L处理组精液保存效果均高于单独添加组，浓度为50μmol/L+25μmol/L处理组的精液保存效果最优，在低温保存第7d时，精子活率为46.77％,活力为32.32％,质膜完整性为33.81％,线粒体活性为35.76％。但浓度为50μmol/L+50μmol/L处理组精液保存效果低于单独添加组。 4.综合以上试验结果，在精液稀释液中添加50μmol/L槲皮素或50μmol/L白藜芦醇有效提高精清中T-AOC、SOD活力，降低MDA含量，从而提高精子质膜完整性及线粒体活性，进而提高了精子的活率、活力和各项运动参数，改善猪精液低温保存的效果;槲皮素和白藜芦醇联合添加具有一定的协同作用，进一步提高了精液保存效果，50μmol/L槲皮素和25μmol/L白藜芦醇联合添加效果最佳。
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