摘要
目的：拟通过细胞实验探讨EGCG激活Bcl-2/Bax信号通路，促进TNBC凋亡的现代作用机制，为药物的临床应用提供理论依据。 材料与方法：选择对数期生长的三阴性乳腺癌（MDA-MB-231）细胞，将MDA-MB-231细胞接种于96孔板中。分别使用不同浓度的EGCG（0,10,20,40,60,80umol/L）干预24h、48h、72h。在干预结束后，采用CCK8方法检测绿茶提取物EGCG对细胞活性的影响，筛选有效药物浓度及干预时间。随后重新将MDA-MB-231细胞接种于6孔板中，选取梯度浓度EGCG干预细胞48h，收集细胞并用RIPA裂解液提取蛋白质。采用Westernblot的方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达，流式细胞术检测EGCG对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。 结果： 1.EGCG对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能够起到抑制作用。不同浓度的EGCG作用于细胞24h，48h，72h后，随着时间的延长及浓度的升高，乳腺癌细胞的细胞存活率明显下降。经过相同时间处理的乳腺癌细胞，药物浓度越大对细胞的增殖率影响愈明显。同样，相同药物浓度处理后的细胞，处理的时间越长对细胞的增殖率影响越明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 2.EGCG可以激活三阴性乳腺癌细胞凋亡相关信号通路，从而促进MDA-MB-231细胞凋亡。其中Caspase3、Bax蛋白表达随着EGCG浓度的升高而增加，Bcl-2蛋白表达随着EGCG浓度的升高而降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 3.EGCG可以促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡。其中随着浓度的增高，20umol/L的EGCG可以最显著的促进MDA-MB-231细胞早期凋亡（P＜0.05）；细胞晚期凋亡比例随着EGCG浓度的增加而增加（P＜0.05）；而与不加药物组相比，EGCG可以显著促进MDA-MB-231细胞总凋亡（P＜0.05）。 结论： 1.绿茶提取物EGCG针对三阴性乳腺癌中的湿热蕴结证型疗效显著 2.EGCG可以抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞存活率，促进细胞凋亡，其针对TNBC的疗效存在着一定的剂量相关性。本实验结果为后续基础研究及临床应用提供了实验依据。 3.EGCG对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡作用与其激活Bcl-2/Bax信号通路，促进Caspase-3表达密切相关，其促凋亡作用研究作为EGCG临床应用中重要的参考依据。
NETL