摘要
目的：本研究通过对肠道菌群的测序分析，探讨丹栀逍遥散抑制乳腺癌发生发展及其可能分子机制，为丹栀逍遥散防治乳腺癌的基础研究提供参考。 材料与方法： 1.观察丹栀逍遥散对人乳腺癌MDA-MB-231细胞荷瘤裸鼠肠道菌群的影响 SPF级6周龄BALB/c-nu雌性裸鼠44只，进行适应性常规喂养7天后，将处于对数生长期稳转MDA-MB-231-GFP细胞悬液（密度为5×105/mL）接种于裸鼠乳房脂肪垫下，建立肿瘤模型。采用随机分组法将造模成功裸鼠分为正常对照组、模型组、丹栀逍遥散组(11.69g·kg-1)、西黄丸组(0.78g·kg-1)，每组11只。乳腺癌细胞接种1天后，每日按固定的时间进行一次药物灌胃，连续灌胃22天，等量的生理盐水给予正常对照组、模型组进行灌胃处理。末次给药2小时后，进行处死取材，收集肠道内容物和粪便，并进行微生物多样性扩增子测序。通过对肠道微生物Alpha多样性差异分析、Beta多样性分析、相对丰度柱形累加图分析筛选出差异菌群，并对菌群多样性、丰富度、结构进行分析。 2.观察丹栀逍遥散含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的影响 制备丹栀逍遥散高、低剂量(17.98，8.99g·kg-1)组含药血清和空白血清。丹栀逍遥散含药血清干预人乳腺癌MCF-7细胞。细胞划痕愈合实验检测MCF-7细胞的迁移能力；ELISA法检测MCF-7细胞中炎症因子IL-10、IL-23的表达；Westernblot法检测MCF-7细胞中STAT3、P-STAT3、JAK2、P-JAK2、IL-6蛋白的表达。 结果： 1.丹栀逍遥散对人乳腺癌MDA-MB-231细胞荷瘤裸鼠肠道菌群的影响 丹栀逍遥散在一定程度上恢复了样本的物种丰富度和均匀度。恢复了肠道菌群的改变情况，对肠道微生态失衡有一定的改善作用，且在一定程度上恢复了肠道菌群组成和结构。与模型组相比，在门水平上丹栀逍遥散组可以升高拟杆菌门Bacteroidetes的相对丰度，降低Cyanobacteria的相对丰度。在纲水平上可以升高拟杆菌纲Bacteroidia的相对丰度，降低Oxyphotobacteria的相对丰度。在目水平上可以升高拟杆菌目Bacteroidales的相对丰度，降低Chloroplast的相对丰度。在科水平上可以升高Muribaculaceae的相对丰度。在属水平上可以升高Prevotellaceae_UCG-001的相对丰度，降低Lachnospiraceae_UCG-006的相对丰度。提示丹栀逍遥散可能通过调节肠道菌群发挥抗乳腺癌作用。 2.丹栀逍遥散含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的影响 细胞划痕愈合实验中丹栀逍遥散高、低剂量含药血清组愈合速度明显低于空白血清组。ELISA法发现与空白血清组比较，丹栀逍遥散高、低剂量含药血清组的IL-10、IL-23表达明显减少。Westernblot法发现与空白血清组比较，丹栀逍遥散(17.98，8.99g·kg-1)含药血清组明显下调炎症蛋白IL-6的表达，且丹栀逍遥散(17.98，8.99g·kg-1)含药血清组中的P-JAK2/JAK2、P-STAT3/STAT3蛋白表达明显降低。 结论： 1.丹栀逍遥散可能通过调节人乳腺癌细胞荷瘤裸鼠体内肠道菌群影响炎症反应途经发挥抗肿瘤的作用。 2.丹栀逍遥散含药血清能够显著改变人乳腺癌MCF-7细胞内的炎症变化，其机制可能是通过调控JAK2/STAT3信号通路实现的。
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