摘要
背景及目的： 肝细胞癌(HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈上升趋势，尤其是在中国。随着手术、放疗、化疗、射频消融、靶向治疗和免疫治疗的快速发展，肝癌患者的五年生存期较前有所增加，但预后仍然较差，五年复发率也很高。因此，了解HCC进展的分子机制，以便尽早预测和控制该疾病迫在眉睫。与依赖线粒体氧化磷酸化产生能量的正常分化细胞相比，癌细胞已经进化到利用有氧糖酵解（沃伯格效应）进行生长繁殖，同时为其他合成代谢提供了原料。MicroRNAs（miRs）可通过调控mRNA的翻译或降解靶向多个基因，参与影响正常或肿瘤细胞生理功能的信号转导通路等功能，与有氧糖酵解密切相关。miRs的表观遗传学的变化及其靶基因的异常表达可能为肝癌的检测和治疗干预提供潜在的工具和机会。MicroRNA-21-5p（miR-21-5p）是一种致癌miRNA，在HCC中高表达，而在正常肝组织中表达较低，它能够调节多种生物过程，包括细胞代谢。miR-21-5p过表达被证明可以促进癌细胞增殖、转移，但其在HCC中增殖和有氧糖酵解的调控机制尚不清楚。本实验探究miR-21-5p在HCC中对肝癌细胞恶性行为的影响及糖酵解的调控作用，评价在肝癌细胞中miR-21-5p与SCML2之间的靶向关系，为寻找肝细胞癌的靶向治疗途径提供了新的理论依据。 方法： 1.通过阅读相关文献和利用生物信息学工具分析筛选出肝癌组织中表达上调的miRNA，再挑选出在正常肝组织和肝癌组织中表达差异明显的miRNA，明确研究对象为miR-21-5p。 2.采用蛋白质印记法（WesternBlot）、qRT-PCR和免疫组化探究miR-21-5p和目的基因SCML2在肝癌细胞中的表达情况。 3.通过转染hepG2、huh-7细胞得到肝癌细胞模型，MTT法检测miR-21-5p对肝癌细胞增殖的影响。 4.应用靶基因预测软件预测miR-21-5p可能的靶基因，并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-21-5p与靶基因的之间相互作用关系。 结果： 1.MTT比色法分析结果表明miR-21-5p高表达组能够促进肝癌细胞的增殖。 2.使用WesternBlot、免疫组化和qRT-PCR分析指出SCML2的表达与肝癌组织中miR-21-5p呈正相关。 3.miR-21-5p/SCML2信号轴通过有氧糖酵解调控肝细胞癌的演进： 1)利用靶基因预测工具筛选出miR-21-5p的靶基因为SCML2，生信在线分析网站提示SCML2在HCC中高表达，且与HCC预后不良密切相关。 2)双荧光素酶报告基因实验证实miR-21-5p直接靶向作用SCML2的3′UTR非翻译区（3′UTR位点），促进SCML2的mRNA和蛋白表达水平。此外，miR-21-5p与SCML2的野生型3′UTR位点相互作用，但对突变型3′UTR位点没有影响。 3)葡萄糖摄取和乳酸生成实验证实miR-21-5p促进肝细胞癌的有氧糖酵解过程。4.SCML2在HCC患者肿瘤组织和细胞中的表达增加，并与miR-21-5p的表达呈正相关。 结论： 在HCC中miR-21-5p表达上调，miR-21-5p通过靶向SCML2增强肝癌细胞的有氧糖酵解，促进肝癌细胞增殖。
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