摘要
目的： 本实验以抑郁合并冠心病大鼠作为实验对象，通过观察各组相关指标的变化。对比施治过程中不同方案干预效果的差异，探讨针刺治疗抑郁合并冠心病的生物学机制，为临床治疗抑郁症和心血管相关疾病提供科学实验数据。 材料与方法： 健康雄性SD大鼠50只，体重180～220g，在动物实验中心适应性喂养3天后，根据体重等行为学选取综合评分最相近的40只SD大鼠，随机分为空白组、模型组、舍曲林组、针刺组，每组10只。除空白组外，其余组均进行为期28天的慢性非预期轻度刺激建模（chronicunexpectedmildstimulation,CUMS）。在第27、28天空白组以0.3ml/100g腹腔注射生理盐水作为对照，其余各组用10%水合氯醛溶液以0.3ml/100g腹腔注射麻醉，并采用多点位皮下注射8.5mg/100g的盐酸异丙肾上腺素，以构建双心病模型。造模成功后，空白组继续正常进食，其余各组继续采用CUMS方法反复刺激。同时，舍曲林组大鼠给予舍曲林溶液1mg/100g/d灌胃，针刺组大鼠分别绑在自制的大鼠固定板上,用华佗牌针灸针（0.18×25mm）进行百会、内关、足三里、太冲各穴位进针约2mm后，连接电针仪并设置参数为疏密波，频率2Hz，电流0.6mA，观察大鼠四肢轻微振动，每次15min，一天1次。模型组仅固定15分钟，不针刺，并按各自体重情况等体积灌胃生理盐水。以上操作每日定时执行，连续治疗21天。在此期间，分别在造模前，造模后和治疗后检测大鼠一般情况各项行为学评分，即体重、糖水偏嗜、强迫游泳、不动时间、旷场实验，以及心电图。治疗结束后，将大鼠麻醉处死后固定在操作台上，取腹主动脉血、冰上取海马体及心脏组织，分别固定在多聚甲醛及EP管内进行冷冻。用WB技术检测大鼠海马内NLRP3蛋白表达水平，采用ELISA试剂盒检测大鼠血清内TXNIP、IL-18含量。 结果： 1.各组大鼠在干预期间的一般状况及行为学 在三天的适应性喂养期间，所有大鼠状态良好，反应灵活，行动迅速，饮水、饮食，大小便可正常进行，毛色洁白有光泽，体重也有所增加，无死亡发生。在CUMS造模后，建模的第一阶段（第1-26天），将空白组的大鼠与适应性喂养阶段进行比较，除体重有所增长外，一般状态及饮水、饮食、二便等均无显著变化，其他组大鼠在CUMS刺激后状态逐渐变差，反应延迟，第二阶段（27-28天），ISO注入后，唇、舌、鼻和爪甲逐渐变成紫色。西药或针灸后，舍曲林组、针刺组，一般状态均有所好转。 2.各组大鼠的体重变化情况 在各阶段的实验结束时，记录每组大鼠的体重值并观察其变化。比较表明造模前适应性喂养期，所有大鼠体重均有增加，CUMS造模后，与空白组比较，模型组、舍曲林组、针刺组大鼠体重均有所下降，结果均有统计学意义（P＜0.05）；治疗后，与模型组相比，针刺组和舍曲林组大鼠体重均呈上升趋势，且有统计学意义（P＜0.05）；而针刺组大鼠和舍曲林组差异无统计学意义。 3.各组大鼠旷场实验评分变化 各阶段实验完成后，记录各组大鼠的旷场试验结果，观察变化。对比说明了CUMS模型建立后与空白组比较，模型组、舍曲林组、针刺组大鼠的旷场实验得分均有所下降，其结果有统计学意义（P＜0.05）；治疗后针刺组大鼠和舍曲林组大鼠旷场试验结果下降趋势明显上调，且结果具有统计学意义（P＜0.05），而针刺组和舍曲林组大鼠之差异无统计学意义（P＞0.05）。 4.各组大鼠糖水偏嗜度变化情况 适应性喂养后，发现各组大鼠对糖水的偏好无明显差异，且无统计学意义（P＞0.05），建模后与空白组相比，模型组、舍曲林组、针刺组对糖水的偏好程度均有明显的下降（P＜0.05)。给予治疗后与空白组进行比较，模型组、舍曲林组和针刺组大鼠对糖水的偏好程度均有所降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；与模型组相比，舍曲林组和针刺组大鼠对糖水的偏嗜程度明显升高，且差异有统计学意义（P＜0.05）；针刺组和舍曲林组大鼠差异无统计学意义（P＞0.05）。 5.各组大鼠强迫游泳不动时间改变 建模后，与空白组相比，模型组、舍曲林组、针刺组均呈上升趋势，结果具有统计学意义（P＜0.05）；治疗后与模型组相比，舍曲林组和针刺组强迫游泳不动时间均呈下降趋势，统计学显著性差异（P＜0.05）；针刺组和舍曲林组大鼠差异无统计学意义（P＞0.05）。 6.各组大鼠心电图变化 CUMS建模28天后，与空白组相比，其余各组均无明显变化。注射异丙肾上腺素后，发现模型组、舍曲林组、针刺组均有明显的ST段下移，提示造模成功。 7.各组大鼠心肌组织和海马体形态学变化 7.1各组大鼠心脏组织形态学变化 大鼠心脏组织切片HE染色显示，空白组大鼠心脏组织结构未见异常改变。模型组心肌组织纤维发生增生，间质松软，心肌细胞存在不同程度的破损与坏死现象。模型组比较，舍曲林组与针刺组出现少量心肌纤维肥大、间隙扩大、细胞损伤坏死、增生、疏松结缔组织等变化不明显。 7.2各组大鼠海马体形态学变化 空白组大鼠神经细胞体排列较整齐，呈多层分布；与空白组比较，模型组神经元排列变得杂乱无章，距离变大；治疗后的舍曲林组和针刺组成团排列较为整齐，细胞核轻度破损，出现轻度病变。 8.各组大鼠血清内TXNIP表达的变化情况 与空白组相比，其余各组的TXNIP的表达量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组对比，舍曲林组、针刺组大鼠血清TXNIP的表达量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与舍曲林组比较，针刺组大鼠血清TXNIP的表达量有所下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。 9.各组大鼠血清内IL-18表达的变化情况 与空白组相比，其余各组的IL-18表达量显著升高，有统计学意义（P＜0.05）；与模型组对比，舍曲林组、针刺组大鼠血清IL-18的表达量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；而针刺组大鼠和舍曲林组差异无统计学意义（P＞0.05）。 10.各组大鼠海马体NLRP3蛋白表达改变 与空白组对比，模型组大鼠海马体内的NLRP3蛋白的表达量明显升高，且有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，舍曲林组、针刺组大鼠海马体内的NLRP3蛋白的表达量均有所降低，且差异有统计学意义（P＜0.05）；与舍曲林组对比，针刺组大鼠海马体内的NLRP3蛋白的表达量有所降低，有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 1.针刺百会、内关、足三里、太冲穴后，抑制了大鼠血清TXNIP的表达和大鼠海马体内NLRP3的表达，提示炎症降低，针刺治疗对抗炎有着积极的作用。 2.电针针刺对双心病（抑郁合并冠心病）大鼠有着较好的治疗作用。
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