摘要
刚地弓形虫（T.gondii）是一种专性细胞内的机会致病性的原生动物寄生虫。可以感染包括人类在内的哺乳动物，在世界范围内广泛传播并且约30%人口统计为血清学阳性。弓形虫引起的弓形虫病目前是一种常见的疾病。并且对农业领域的牛羊等家畜造成重大的经济损失。弓形虫CDPK3是一种钙离子依赖性蛋白激酶，定位在寄生虫外围，在寄生虫逸出中起着至关重要的作用。但CDPK3在调节宿主免疫中起的作用仍不清楚，本研究主要以CDPK3作为研究对象，采用遗传学生物学方法研究CDPK3敲除虫株作为减毒活疫苗对急性、慢性弓形虫感染的保护作用。 目的： 研究CDPK3敲除虫株作为减毒活疫苗在抵抗急性慢性弓形虫感染中的免疫保护作用 方法： （1）比较野生型和ME49Δcdpk3虫株感染小鼠后在小鼠体内的播散情况：腹腔注射106野生型和ME49Δcdpk3虫株观察各小鼠35天内的死亡情况，脑包囊的形成情况，小鼠的活力以及小鼠血清中IgG的水平，感染弓形虫7天检测小鼠肝，脾，眼，心脏，脑，肺等脏器内弓形虫的负荷。 （2）ME49Δcdpk3虫株做为疫苗的评估：免疫小鼠再次感染多种野生型虫株，包括I型RH、II型ME49、Chinese1WH3和WH6，以及ME49，WH6包囊。检测免疫75天的小鼠脾细胞CD3+CD8+T淋巴细胞和CD3+CD4+T淋巴细胞所占的比例，以及脾细胞培养上清中IFN-γ、TNF-α、IL-12p70和IL-10的水平。检测疫苗免疫35天，75天，125天后小鼠血清中IgG，IgG1和IgG2a的水平。检测疫苗接种125天的免疫小鼠血清对寄生虫感染的影响。 结果： （1）小鼠感染106野生型和ME49Δcdpk3虫株后，感染ME49Δcdpk3虫株的小鼠几乎不死亡，而感染野生型虫株的小鼠第8天就开始出现死亡，死亡率达到70%。并且野生型虫株感染7天的小鼠肝，脾，眼，心脏，脑，肺等脏器内弓形虫的负荷明显高于ME49Δcdpk3虫株感染的小鼠。 （2）ME49Δcdpk3疫苗免疫小鼠能够抵抗包括I型RH、II型ME49、Chinese1WH3和WH6速殖子，以及ME49，WH6包囊的再次感染。与未免疫小鼠相比，ME49Δcdpk3疫苗免疫75天的小鼠脾细胞中CD3+CD8+T淋巴细胞和CD3+CD4+T淋巴细胞所占的比例明显增高。脾细胞培养上清中IFN-γ、TNF-α、IL-12p70和IL-10细胞因子的水平明显升高。ME49Δcdpk3疫苗免疫35天，75天，125天的小鼠血清中IgG，IgG1和IgG2a的水平明显增高并且IgG亚型IgG2a水平明显高于IgG1。ME49Δcdpk3疫苗免疫125天的小鼠血清能够帮助正常小鼠抵抗弓形虫的感染。 结论： ME49Δcdpk3疫苗接种可引发细胞免疫和体液免疫，并保护小鼠免受弓形虫感染。
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