摘要
目的：孤独症谱系障碍（autismspectrumdisorder,ASD）是一种婴幼儿起病、危害巨大的神经发育障碍性疾病，缺乏有效的药物疗法，且发病率逐年升高。目前本病的具体病因仍不清楚，但总的来说，是遗传与环境因素共同作用的结果。研究表明，肠道菌群作为重要的环境因素之一与ASD之间存在相关性。因此，对ASD儿童肠道菌群的研究有望进一步诠释ASD的病因及机制。虽然已有研究发现ASD儿童肠道菌群的特征与正常发育（typicallydeveloping,TD）儿童不同，但研究数量较少，且多数研究的结果迥异。为进一步阐明ASD与TD儿童肠道菌群特征的异同，并为探索ASD与肠道菌群之间具体相关性提供依据，本研究对ASD和TD儿童肠道菌群结构及功能的差异进行了分析。 方法：将我院儿童神经康复门诊确诊的30例儿童作为ASD组，招募20例TD儿童纳入TD组作对照。收集2组儿童的粪便，提取粪便样本DNA，质检合格后利用引物515F（5''-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3''）和806R（5''-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3''）对细菌16SrDNA的V4区进行PCR扩增。纯化的扩增产物质检合格后进行高通量测序。对测序所得的原始数据进行拼接、质控、过虑、去嵌合体及降噪，得到扩增子序列变体（ampliconsequencevariants,ASVs）。基于Silva138数据库对ASVs的代表序列进行物种注释。基于注释信息，分析菌群结构，进行功能预测，并比较组间差异。 结果：2组样本中相对丰度位列前四的菌门相同，依次为厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门；相对丰度最大的菌属均为拟杆菌属，其次是粪杆菌属。ASD组和TD组儿童肠道菌群alpha多样性指数（Chao1、Shannon和Simpson）比较，差异均无统计学意义（Pgt;0.05）。在门和纲水平，2组儿童肠道菌群的结构差异无统计学意义（Pgt;0.05）。在属水平，ASD组巨单胞菌属、巴恩斯氏菌属、小杆菌属、巨球菌属、瘤胃球菌属扭链群及梭杆菌属的丰度大于TD组（Plt;0.05）。巨单胞菌属、小杆菌属、巨球菌属、消化链球菌科、巴恩斯氏菌属、瘤胃球菌属扭链群及链型杆菌属等可作为ASD组的生物标记物，毛螺菌科、消化球菌科、Saccharimonadaceae、TM7x、阿里松氏菌属、帕拉普氏菌属、乳杆菌目_g_P5D1_392及Saccharimonadales等可作为TD组的生物标记物。2组肠道菌群的表型特征预测未见显著性差异。ASD组肠道菌群的色氨酸降解、谷氨酸降解及丁酸盐生成等代谢功能的丰度低于TD组（Plt;0.05），而γ-氨基丁酸降解功能的丰度高于TD组（Plt;0.05）。 结论：ASD和TD儿童肠道菌群的alpha多样性无显著性差异。2组菌群在门和纲水平上的物种分布无显著性差异，但在目、科及属水平的物种构成不同。以巨单胞菌属、罕见小球菌属及小杆菌属等属水平细菌为特征可以较准确地区分2组样本。2组儿童肠道菌群的表型特征无显著不同，但菌群的代谢功能存在显著性差异。
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