摘要
海洋共附生微生物能够产生具有应用潜力的天然活性物质，目前已有多种海洋无脊椎动物共附生微生物多样化分析的研究，但对脉红螺共附生微生物的分离与多样性研究尚未见报道。本文对脉红螺DNA基因组进行高通量测序分析，同时利用多种培养基分离培养脉红螺共附生微生物，并对纯化的微生物进行16SrRNA、ITS序列分析，主要结果如下: 1.通过高通量测序分析脉红螺基因组，按照97％的序列相似性聚类，利用blastn将OTU序列与对应数据库比对进行物种分类地位注释，筛选出序列的最佳比对结果。注释结果统计共得到98个OTU,隶属于14门30纲45目55科68属;14个门分别是变形菌门(Proteobacteria),柔壁菌门(Tenericutes),放线菌门(Actinobacteria),拟杆菌门(Bacteroidetes),SR1菌门(SR1),梭杆菌门(Fusobacteria),candidate_division_WPS-1门，厚壁菌门(Firmicutes),螺旋体门(Spirochaetes),绿屈挠菌门(Chloroflexi)，疣微菌门(Verrucomicrobia),蓝细菌一叶绿体门(Cyanobacteria-Chloroplast),酸酐菌门(Acidobacteria),子囊菌门(Ascomycota)及11种未知类群。其中变形菌门、放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门占据重要类群地位。 2.利用2216E固体培养基，牛肉膏蛋白胨培养基，MRS培养基，M17琼脂培养基，假单胞菌选择培养基，胰蛋白胨大豆琼脂，胰蛋白胨大豆肉汤琼脂培养基，哥伦比亚培养基，脑心浸液肉汤琼脂培养基，乳糖胆盐发酵培养基，螺肉汤琼脂培养基和拟杆菌培养基分离培养脉红螺共附生微生物。经统计共分离培养出540株菌株，排查重复，通过形态学观察选择60株进行菌株保存，M17琼脂培养基分离菌株种类最多。 3.对已分离纯化的菌株进行16SrDNA和ITS序列分析，16SrDNA全长使用Blast比对GTDB数据库，ITS使用Blast比对UNITE数据库。初步鉴定菌株分属5个门，6个纲，6个目，15个科，20个属和9株潜在新菌种(物种最高相似性低于98.65％),潜在菌种占总菌种的31.03％。5门分别为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和子囊菌门(Ascomnycota),其中最优势门为放线菌门，占总菌种的70.0％。对照脉红螺基因组DNA高通量测序测序分析，利用培养组学进行分离培养，能够培养脉红螺的部分菌群，同时也能分离免培养技术未能检测到的菌群。 本研究结果表明脉红螺共附生微生物多样性比较丰富，尚有许多潜在新菌种有待分离培养鉴定，需要继续使用高通量测序分析和培养组学等方法对脉红螺共附生微生物群进行探索，并对培养条件进行优化，以期分离出更多的菌种。
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