摘要
黑皮鸡枞菌(Oudemansiellaraphanipies)是一种传统的食用菌，富含多种营养成分，包括氨基酸、蛋白质、多糖和多酚等。研究表明黑皮鸡枞菌多糖(Oudemansiellaraphanipiespolysaccharides,ORP)具有调节肠道、修复肝损伤和抗氧化等功效。本研究从提取工艺、分离纯化、结构表征和生物活性等方面,对黑皮鸡枞菌多糖开展了系统研究，主要研究结果如下: (1)黑皮鸡枞菌多糖的提取工艺优化 采用超声波提取法，研究了超声温度、超声时间、超声功率和料液比对ORP提取率的影响，并通过正交试验对提取工艺进行了优化,得到的最佳工艺参数为:超声温度40℃、超声时间20min、超声功率180W和料液比1∶40(g/mL)。在此条件下黑皮鸡枞菌多糖提取率为5.64±0.12％。 (2)黑皮鸡枞菌多糖的分离纯化 运用三氯乙酸对ORP进行去蛋白处理，在水浴温度50℃、水浴时间50min以及TCA浓度为2％的此条件下,去蛋白综合指标达到91.29％。去蛋白后的ORP通过DEAE-52离子交换色谱柱洗脱后得到三个洗脱峰，取最高峰ORP-A(1.52×104Da)进行葡聚糖凝胶色谱柱洗脱后得到ORP-A1。ORP和ORP-A1经过紫外分光光度计测定可得，总糖含量分别为35.23±1.29％、74.80±1.19％;蛋白质含量分别23.05±0.60％、0％。通过HPGPC法测得ORP-A1的Mw为2.08×103Da。 (3)黑皮鸡枞菌多糖的结构表征 通过离子色谱法测得ORP-A1主要由Glc、Gal、Fuc、Xyl、Man5种单糖组成，其摩尔比为2.362∶0.390∶0.119∶0.091∶0.055;通过红外光谱测定，ORP-A1为β-吡喃环多糖;甲基化和核磁共振结果表明ORP-A1的主链包括→3,6)-β-D-Glcp-(1→和→3)-β-D-Glcp-(1→,支链包括β-D-Glcp-(1→、→2,6)-α-D-Galp-(1→、→6)-α-D-Galp-(1→以及α-L-Fucp-(1→;扫描电镜结果表明,ORP-A1具有蓬松絮状结构。 （4）黑皮鸡枞菌多糖的抗氧化和降血糖活性研究 通过ORP和ORP-A1的抗氧化活性和降血糖活性测定结果表明，在0.125-4.000mg/mL浓度范围内随着多糖浓度不断增大，ORP和ORP-A1对自由基的清除能力以及对酶的抑制率都在逐渐增强，且与质量浓度呈正相关。其中ORP对ABTS和羟基自由基清除率较突出，在4.000mg/mL浓度时，清除率分别为86.11±2.44％、87.26±2.96％,IC50值分别为0.409mg/mL、0.104mg/mL;而ORP-A1对α-葡萄糖苷酶和淀粉酶的抑制能力表现较强,在4.000mg/mL浓度时,抑制率分别为92.16±3.59％、74.71±1.87％,IC50值分别为0.038mg/mL、0.505mg/mL。
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