摘要
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发生率和死亡率在女性中居于首位，因此对其发生发展以及临床治疗的研究就显得尤为重要。组蛋白乙酰化调节是一种重要的表观遗传修饰，在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histonedeacetylaseinhibitor,HDACi)通过改变特异基因的转录引起肿瘤细胞的生长停滞、分化和/或凋亡。西达苯胺(Chidamide)是第三代的HDACi,在血液系统肿瘤和包括乳腺癌在内的实体瘤中都有很好的抗肿瘤效果，相较于SAHA,TSA等第二代HDACi具有更佳的疗效。但西达苯胺临床应用过程中也存在易耐药、有毒性等抗肿瘤药物的共同弊端，限制了其临床应用。近年来研究表明长链非编码RNA(Longnon-codingRNA,LncRNA)在分子水平上调控基因及蛋白的表达。也有研究发现某些特异LncRNA在药物的耐药机制中发挥重要作用,但西达苯胺所诱发的耐药，是否有特定LncRNA分子参与还尚不清楚。肿瘤微环境(TumorMicroenvironment,TME)在肿瘤进展中起着显著的作用，TME对肿瘤形成、进展和治疗抵抗至关重要。肠道微生物的改变在多个层面上都与肿瘤相关。本研究以乳腺癌为研究对象，筛选并验证西达苯胺作用乳腺癌细胞后高表达的特异LncRNA分子及其互作蛋白。在细胞及分子水平上探讨特异LncRNA靶向蛋白对西达苯胺药理作用的影响，以及西达苯胺对肠道微生物的作用，以上研究为揭示乳腺癌耐药性的机制奠定了坚实的实验基础。 方法 1.以乳腺癌ER阳性细胞系MCF-7和三阴细胞系MDA-MB-231为研究对象,经西达苯胺处理，DMSO为对照，MTT实验检测细胞活力。 2.应用高通量测序联合生物信息学软件（DEGseq软件）进行差异表达分析，通过GO通路（http://www.geneontology.org）分析筛选西达苯胺诱导的高表达LncRNA分子，并通过RNAplex软件建立LncRNA作用网络，确定特异LncRNA可能的靶基因。Real-timePCR验证筛选的高表达LncRNA分子及互作蛋白的准确性。 3.设计高表达LncRNA的特异siRNA分子并转染乳腺癌细胞,通过Real-timePCR、Westernblot和细胞活力试验检测特异LncRNA分子静默对西达苯胺作用乳腺癌细胞的影响。 4.设计互作蛋白的特异siRNA并转染乳腺癌细胞，通过Real-timePCR、Westernblot和细胞活力试验检测互作蛋白静默对西达苯胺作用乳腺癌细胞的影响。 5.通过牛津杯法和细菌计数实验测定西达苯胺对肠道微生物中大肠杆菌的作用。 结果 1.西达苯胺抑制乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖。 2.西达苯胺作用于乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞后存在LncRNAENST00000448869.1高表达，且与巢蛋白（Nestin）存在互作关系。 3.LncRNAENST00000448869.1的表达水平降低后，Nestin的mRNA表达也降低，乳腺癌细胞的细胞活力降低。 4.Nestin的mRNA表达水平降低后，LncRNAENST00000448869.1的表达没有减少，乳腺癌细胞的细胞活力降低。 5.西达苯胺对大肠杆菌的生长没有明显的抑制作用。 结论 1.西达苯胺抑制乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖，西达苯胺作用后存在LncRNA分子ENST00000448869.1和Nestin高表达。 2.LncRNAENST00000448869.1与Nestin的表达在西达苯胺作用的环境中存在正相关性，LncRNAENST00000448869.1表达降低，增强了西达苯胺对乳腺癌细胞的药理作用。 3.Nestin与LncRNAENST00000448869.1无负反馈关系，Nestin的功能丧失抑制了西达苯胺作用下的乳腺癌细胞的细胞活力，加强了西达苯胺的药理作用。 4.西达苯胺对肠道微生物中大肠杆菌没有抑制作用。
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