摘要
目的：优化苦酒汤加工工艺与配方，并通过体内、体外实验探究苦酒汤对慢性咽炎的药效及作用机制。 方法：1.苦酒汤配方优化：以对甲型溶血性链球菌抑菌圈的平均直径作为苦酒汤配方优化评价指标，采用单因素结合正交试验对苦酒汤配方进行优化。 2.体外实验：制备空白组、阳性药组、苦酒汤低、中、高剂量组及苦酒汤古方组大鼠含药血清，体外培养人支气管上皮细胞（16HBE），以20ug/ml的脂多糖（LPS）及10%含药血清进行干预，CCK-8检测各组含药血清对LPS诱导的16HBE细胞增殖活力的影响，ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量，PCR检测P65、IκBαmRNA的表达，WesternBlot检测P-p65蛋白的表达，流式细胞术检测除苦酒汤古方组外其余各组16HBE细胞凋亡情况。 3.体内实验：将72只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及苦酒汤低、中、高剂量组，采用2.5%氨水制备大鼠慢性咽炎模型，阳性药组给药剂量为每日1.3125g·kg-1，低、中、高剂量组给药剂量分别为每日0.5、1、2mL·kg-1，空白组、模型组给予等量生理盐水，各组均采取灌胃给药，每日1次，ELISA检测大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量，HE染色观察大鼠咽部粘膜形态变化，WesternBlot检测p-65、P-p65、IκBα、P-IκBα、IKKα、P-IKKα蛋白的表达，PCR检测P65、IKKαmRNA的表达。 结果：1.苦酒汤配方优化结果为：米醋60mL，鸡蛋清30g，清半夏10g，凤凰衣1g。 2.体外实验结果：与空白组比较，模型组16HBE增殖活力下降（P＜0.01），TNF-α、IL-6和IL-1β含量升高（P＜0.01），P65mRNA表达上调，IκBαmRNA表达下调（P＜0.01），P-p65蛋白表达上调（P＜0.01），细胞凋亡率上升（P＜0.01）。与模型组比较，苦酒汤中、高剂量组及古方组细胞增殖活力上升（P＜0.01），TNF-α、IL-6、IL-1β含量下降（P＜0.01），P65mRNA表达下调，IκBαmRNA表达上调（P＜0.01），P-p65蛋白表达下调（P＜0.01），苦酒汤低、中、高剂量组细胞凋亡率下降（P＜0.01）。与苦酒汤古方组比较，苦酒汤高剂量组TNF-α、IL-1β含量下降（P＜0.01），P65mRNA表达下调（P＜0.01）。 3.体内实验结果：与空白组比较，模型组TNF-α、IL-6和IL-1β含量升高（P＜0.01），粘膜层角化明显，可见大量炎性细胞浸润，P-p65、P-IκBα、P-IKKα蛋白表达上调（P＜0.01），P65、IKKαmRNA表达上调（P＜0.01）。与模型组比较，苦酒汤中、高剂量组TNF-α、IL-6和IL-1β含量下降（P＜0.01），粘膜层形态良好，未见角化复层扁平上皮，有少量炎性细胞浸润，P-p65、P-IκBα、P-IKKα蛋白表达下调（P＜0.01），P65、IKKαmRNA表达下调（P＜0.01）。 结论：经工艺优化后的苦酒汤制备方便，用量明确，其含药血清能够改善LPS诱导的16HBE细胞炎性损伤，药效优于原方。苦酒汤对P-p65、P-IκBα、P-IKKα等指标的上调具有明显抑制作用，改善了大鼠咽部粘膜形态，下调了炎症因子水平，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。
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