摘要
目的： 胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤。胃癌早期发病较为隐匿，并且晚期治疗预后不佳，因此临床上对新的早期筛查以及诊疗方式的需求十分迫切。长链非编码RNA被发现以调控手段广泛参与了许多肿瘤的发生发展。LncRNAHOXC-AS2近年来被发现在多种肿瘤中表达上调。然而，其在胃癌中的临床意义和具体生物学机制却未见报道。在本研究中，我们对来自TCGA数据库的数据以及临床胃癌标本及血浆样本中HOXC-AS2的表达进行分析。探究HOXC-AS2表达与临床病理数据之间可能的关系。沉默HOXC-AS2后对胃癌细胞的恶性表型进行观察，并研究其中具体的作用机制，探索HOXC-AS2作为胃癌的新型生物标记物和治疗靶点的潜力。 方法： 1、下载TCGA生物信息学数据库的数据，分析胃癌中差异表达的lncRNA，并且结合文献，筛选出胃癌中高表达的lncRNAHOXC-AS2。 2、通过qRT-PCR测定HOXC-AS2的表达量；卡方检验分析HOXC-AS2表达量与临床病理特征的关联；HOXC-AS2表达量与总生存期的关系采用Kaplan-Meier法进行生存分析；血浆中HOXC-AS2的诊断价值通过构建ROC曲线评估。 3、通过构建HOXC-AS2沉默的细胞系，并对胃癌细胞表型进行分析。 4、qRT-PCR实验筛选出HOXC-AS2可能的下游通路。 5、qRT-PCR、Westernblot、RIP实验结果验证HOXC-AS2和下游靶标基因间的作用关系。 6、通过细胞表型实验验证HOXC-AS2在胃癌中的机制。 结果： 1、本研究发现HOXC-AS2在胃癌组织及血浆中表达均显著上调；分析组织中HOXC-AS2相对表达量与临床病理数据之间的联系，提示高表达与较高的TNM分期、淋巴结转移具有明显相关性；生存曲线分析揭示HOXC-AS2高表达的患者总体生存期缩短；血浆中HOXC-AS2中的AUC值为0.84，表明有诊断价值。 2、沉默HOXC-AS2后可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，并且阻滞细胞周期进程。 3、GESA分析显示HOXC-AS2可能在细胞周期检查点、PRC2等通路中富集，核质分离实验显示HOXC-AS2主要的亚细胞定位是细胞核内；qRT-PCR及Westernblot结果显示p21、p27是HOXC-AS2的下游基因，且EZH2表达水平与HOXC-AS2呈正相关。HOXC-AS2可能是通过抑制p21、p27的表达来促进胃癌的进展，而EZH2可能也以表观遗传调节因子的形式参与了这一通路。 4、RIP实验结果显示HOXC-AS2可与EZH2结合，表明HOXC-AS2可通过结合EZH2调控p21、p27的表达。 5、Westernblot实验证实，敲减HOXC-AS2后，EZH2、H3K27me3蛋白水平明显降低，p21、p27水平上调。在此基础上使用GSK343抑制EZH2，p21、p27蛋白水平并未出现进一步降低，提示EZH2对下游基因p21、p27的抑制与HOXC-AS2可能是同一条通路上的。 6、细胞功能实验提示HOXC-AS2敲减后胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力下降，细胞周期受到阻滞，而在此基础上合并GSK343抑制EZH2后，胃癌细胞恶性表型并没有进一步变化。 结论： LncRNAHOXC-AS2作为一种促癌因子，通过与转录因子EZH2结合以表观遗传方式抑制p21、p27表达，促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭及细胞周期进程，影响胃癌的进展。
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