摘要
便秘作为一种常见的胃肠道疾病，其发病率具有明显的性别差异。研究表明女性人群更易受到便秘问题的困扰，且成因复杂，包括生活方式、药物、情绪压力、激素水平等。已有研究表明，益生菌可以通过影响肠道内短链脂肪酸等代谢物的水平缓解女性便秘，但其中的具体机制鲜有报道。临床研究发现，雌激素受体β（Estrogenreceptorβ；ERβ）在女性便秘患者的肌间及黏膜下神经丛中表达下调，猜测ERβ可能是造成便秘的重要因素之一。基于此，本研究以ERβ为切入点，应用ERβ抑制剂（枸橼酸他莫昔芬）构建适用于女性便秘的动物模型，并选取7株对雌激素具有不同影响作用的益生菌对其进行干预，进而筛选出对女性便秘具有缓解作用的益生菌，从肠神经和肠屏障的角度解析其缓解女性便秘的可能机制。主要研究内容及结果如下： 1.应用洛哌丁胺、ERβ抑制剂以及二者联合使用处理大鼠，以洛哌丁胺处理组作为阳性对照，构建靶向女性便秘的动物模型。结果表明，经ERβ抑制剂处理后，大鼠的粪便含水量显著降低，排首粒黑便时间延长，即单独使用ERβ抑制剂他莫昔芬可成功构建模拟女性便秘的动物模型。进一步对不同造模药物处理后大鼠肠神经系统、肠屏障相关指标进行了检测，结果发现ERβ抑制剂处理后大鼠呈现便秘状态，同时伴有肠神经和肠屏障的损伤。 2.根据上述动物模型，选取对雌激素具有不同影响作用的7株益生菌（3株长双歧杆菌、2株两歧双歧杆菌和2株鼠李糖乳杆菌）进行干预，通过检测便秘相关指标，筛选出5株对便秘具有缓解作用的益生菌，包括2株长双歧杆菌（CCFM1240、CCFM1112）、1株两歧双歧杆菌CCFM1163和2株鼠李糖乳杆菌（FJSWX1L3、FNMGHLBE6L3）。 3.由于应用ERβ抑制剂构建的便秘模型伴有肠神经和肠屏障的损伤，因此，本研究从肠神经和肠屏障的角度解析益生菌缓解女性便秘的潜在机制。结果表明（1）2株长双歧杆菌，1株两歧双歧杆菌以及鼠李糖乳杆菌FNMGHLBE6L3可以通过提高PGP9.5及S100β修复肠神经，并刺激肠神经胶质细胞释放神经递质ACh；（2）益生菌可通过肠道生物屏障缓解便秘：两株长双歧杆菌显著下调了Parabacteroides的相对丰度，两歧双歧杆菌CCFM1163显著增加了Bifidobacterium、Lactobacillius和Marvinbryantia的相对丰度，而降低了Parabacteroides、Eubacteriumcoprostanollgenesgroup、RuminococcaceaeNK4A214group、Oscillibacter、Ruminiclostridium9、Dorea和Fournierella的相对丰度，两株鼠李糖乳杆菌显著上调Bifidobacterium和Lactobacillius的相对丰度，下调了Parabacteroides、Dorea、RuminococcaceaeNK4A214group和Fournierella的相对丰度；（3）两株长双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌FNMGHLBE6L3显著增加了粪便中SCFAs的含量（乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸），两歧双歧杆菌CCFM1163增加了粪便中乙酸、丙酸、异丁酸和异戊酸的含量，鼠李糖乳杆菌FJSWX1L3则增加了乙酸和丁酸的含量，从而修复了肠道化学屏障；（4）鼠李糖乳杆菌侧重于通过修复肠道机械屏障缓解便秘：其中鼠李糖乳杆菌FJSWX1L3显著提高了MUC1的水平，促进了粘液的分泌，鼠李糖乳杆菌FNMGHLBE6L3则主要通过提高紧密连接蛋白Claudin5、ZO1mRNA表达，改善肠道通透性；（5）双歧杆菌侧重于修复肠道的免疫屏障，其中长双歧杆菌显著增加了Treg细胞的数量，降低了肠道内炎症因子IL-6、TNF-α的水平；而两歧双歧杆菌则主要降低了炎症因子IL-6的水平。 综上所述，通过摄入益生菌可以有效缓解雌激素受体β表达降低的女性便秘，其潜在机制可能是通过肠神经系统、肠道生物屏障、化学屏障、机械屏障、免疫屏障发挥作用。本研究中筛选的5株对女性便秘具有缓解作用的益生菌（长双歧杆菌CCFM1240、长双歧杆菌CCFM1112、两歧双歧杆菌CCFM1163、鼠李糖乳杆菌FJSWX1L3、鼠李糖乳杆菌FNMGHLBE6L3）可能成为一种调节女性便秘的益生菌补充剂。
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