摘要
硒（Selenium,Se）是动物营养中的必需微量元素，在维持机体氧化还原稳态和增强免疫功能中具有重要作用。硒缺乏会导致多种组织器官损伤，包括免疫器官。双酚A（Bisphenol,BPA）是一种广泛应用于现代农业和工业的化学品，已被证实具有免疫毒性。脾脏是作为机体重要的外周免疫器官，也是硒缺乏和BPA暴露的重要靶器官。焦亡是一种程序性细胞死亡方式，在炎症和免疫中起重要作用。然而，关于硒缺乏和BPA联合处理对禽类脾脏损伤过程中焦亡的发生机制尚未报道。因此，本研究旨在探讨硒缺乏和BPA联合诱导肉鸡脾脏细胞焦亡的分子机制。本试验选用60只健康的1日龄爱拔益加（AA）肉鸡随机分为4组（n=15）:对照组（Control组）、双酚A组（BPA组）、硒缺乏组（SeD组）以及硒缺乏和BPA联合处理组（SeD+BPA）。体外试验以马立克氏病脾脏淋巴瘤继代细胞系MDCC-MSB1（MSB1）为研究对象，用缺硒培养基或/和100μMBPA处理细胞24h,最后用8mMROS清除剂NAC干预。应用H&E染色、ICP-MS法、ELISA、CCK-8法、氧化应激试剂盒，免疫荧光（IF）、qRT-PCR和Westernblot等技术，观察脾脏病理学变化、检测硒含量、BPA含量、细胞活力、氧化应激和细胞焦亡水平。本试验主要结果如下: （1）脾脏病理组织学观察结果显示，Control组结构正常完整，红髓与白髓边界较为清晰。与Control组相比，BPA组红髓与白髓边界模糊，红髓可见少量炎性细胞浸润。SeD组可见红髓有少量炎性细胞浸润。SeD+BPA组病理改变明显加重，表现为红白髓界限模糊，红髓内有炎性细胞浸润，白髓内淋巴细胞整体数量减少，出现变性、坏死。这表明硒缺乏和BPA联合可加重脾脏损伤。 （2）脾脏硒含量检测结果显示，SeD组和SeD+BPA组硒含量显著低于Control组和BPA组。此外，SeD+BPA组硒含量明显低于SeD组（P＜0.05）,这表明BPA暴露会降低脾对硒的吸收。BPA含量检测结果显示，BPA组和SeD+BPA组的BPA含量显著高于Control组和SeD组。此外，SeD+BPA组BPA含量显著高于BPA组（P＜0.05）,这表明硒缺乏增加了BPA在脾脏中的蓄积。 (3)硒缺乏或/和BPA暴露显著降低脾脏和MSB1细胞T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px活性（P＜0.05）,提高MDA、H2O2和ROS水平（P＜0.05）;显著增加NLRP3和GSDMD荧光信号以及焦亡相关基因NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的表达（P＜0.05）,且联合处理组中上述指标的变化更为明显，这表明硒缺乏或/和BPA能够诱导脾脏氧化应激和细胞焦亡。 （4）ROS清除剂NAC显著降低了硒缺乏和BPA联合诱导的氧化应激和焦亡，表明氧化应激介导了硒缺乏和BPA联合诱导的焦亡。 综上所述，硒缺乏或/和BPA暴露能够激活ROS/NLRP3途径诱导肉鸡脾脏焦亡，本研究首次阐明了硒缺乏或/和BPA暴露诱导肉鸡脾脏损伤的分子机制，丰富了禽类缺硒性免疫损伤和BPA免疫毒理学的理论研究，为畜禽健康养殖提供环境决策依据。
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