摘要
目的：通过体内外实验探究葛根素对血管内膜新生的影响，并阐述其对血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转化的作用和可能机制。 内容：血管内膜新生的主要原因是血管平滑肌细胞表型转化，葛根素是中药葛根的主要成分，本课题通过在小鼠体内建立颈总动脉内皮损伤模型及体外建立血管平滑肌细胞表型转化模型，探究葛根素对血管内膜新生的影响和对血管平滑肌细胞表型转化的作用及机制，讨论了相关疾病的中西医病因病机，并综述了现代中医药对介入后再狭窄的研究进展。 方法： 1.葛根素对小鼠颈总动脉内皮损伤后内膜新生的影响：实验对象是雄性B129小鼠，将其随机分为药物对照组、假手术组、模型组和葛根素组，每组10只，药物对照组和假手术组仅于颈部左侧作一切口后缝合，模型组和葛根素组施行颈总动脉内皮损伤手术进行造模，所有小鼠造模成功后连续4周灌胃生理盐水或葛根素，4周后取颈总动脉采用OCT包埋，进行HE染色，分析并计算血管的内膜和中膜面积比，并用免疫荧光法检测OPN表达情况。 2.葛根素对血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的作用：从SD大鼠体内提取血管平滑肌细胞，培养至第3代后，验证其细胞纯度，后续实验使用第3-8代细胞完成。体外用PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转化，CCK8检测其药物毒性及细胞增殖情况，划痕及transwell小室检测细胞迁移情况，Westernblot检测收缩表型标志物SMMHC、smoothelin、calponin及合成表型标志物OPN的蛋白表达量。3.葛根素对血管平滑肌细胞表型转化作用的机制研究：用Westernblot检测葛根素和PDGF-BB处理的血管平滑肌细胞中p38MAPK及其磷酸化的蛋白表达水平。 结果： 1.葛根素能够抑制小鼠颈总动脉内皮损伤后的内膜新生：小鼠颈总动脉内皮损伤后，管腔面积减少，内膜/中膜面积增加，说明模型建立成功。葛根素组与模型组相比，内膜/中膜面积明显减小，新生内膜中OPN表达也有所减少。 2.葛根素能够抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转化：葛根素能够抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖，且抑制作用呈剂量依赖性增强。葛根素能够抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞迁移，且作用呈剂量依赖性增强。PDGF-BB能够使血管平滑肌细胞中OPN表达增多，SMMHC、smoothelin和calponin表达减少，葛根素能够逆转该结果。 3.葛根素通过调控p38MAPK通路抑制血管平滑肌细胞的表型转化：与对照组相比，PDGF-BB组p38MAPK磷酸化表达上调，葛根素干预后，与PDGF-BB组相比，p38MAPK磷酸化表达有所下调，并且三组的p38MAPK表达水平不变。 结论： 1.葛根素对小鼠颈总动脉内皮损伤后的内膜新生有抑制作用，这主要与抑制血管平滑肌细胞表型转化有关，提示葛根素有一定的预防PCI术后再狭窄作用。 2.葛根素是通过抑制p38MAPK通路来抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞表型转化的。
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