摘要
研究背景 脓毒症是感染引起的严重的致命性疾病，具有高发病率、高死亡率特点，据统计，全球每年约有1900万脓毒症患者，特别是在重症医学科，约有20%的患者可感染脓毒症，90天死亡率约为35.5%。给社会带来的严重的负担。早期识别并及时干预治疗脓毒症，有助于改善脓毒症患者的预后及避免抗生素滥用导致的严重后果。目前，关于脓毒症诊断通过临床症状及评分来实现，早期诊断脓毒症的方法存在一定的局限性。研究表明，脓毒症生物标志物在脓毒症的诊疗及评判预后中有不可忽视的作用。其中，在血液研究最为广泛，常见的生物标志物有C反应蛋白（CRP）、降钙素原(PCT)、白细胞介素等，但对于血清标志物的获取，需要进行有创操作。目前，iTRAQ蛋白质组学广泛用于生物标志物研究，本研究基于iTRAQ的定量蛋白质组学分析、联合蛋白质印迹试验（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）探索唾液中脓毒症诊断的生物标志物，为脓毒症早期筛查及诊断提供新的参考值指标及方式。 研究目的 本研究基于iTRAQ蛋白质组学分析发现脓毒症组、SIRS组、健康人群组唾液中差异表达的蛋白，筛选并通过蛋白质印迹试验、酶联免疫吸附试验进一步验证，发现唾液中潜在的脓毒症生物标志物。 研究方法 本研究纳入2021年8月至2023年4月于重庆医科大学附属第二医院感染科就诊的患者，及于本中心体检的健康人群。研究对象分为3个组：脓毒症组、SIRS组、健康对照组。纳入标准：1）脓毒症组：根据Sepsis3.0脓毒症诊断标准：感染+序贯器官衰竭评分（SOFA）≥2分；2）SIRS组：符合4项中2项以上即可：1、体温gt;38℃或lt;36℃，2、心率gt;90次/分，3、呼吸频率gt;20次/分或PaCO2lt;32mmHg，4、白细胞总数gt;12*10^9/L或lt;4*10^9/L或未成熟（杆状核）中性粒细胞比例gt;10%。3）健康对照组：临床表现及相关辅助检查未提示有感染指征的人群。排除标准：患以下疾病的人群：1）患有免疫缺陷或自身免疫性疾病，2）患有口腔局部及唾液腺炎症，3）配合度不高或难以配合的患者。通过iTRAQ蛋白质组学分析发现脓毒症组、SIRS组、健康对照组唾液中差异表达的蛋白，并将筛选出目标蛋白在WB、ELISA中验证，使用GraphPadPrism8.0进行数据分析，评估诊断效能。 研究结果 通过iTRAQ蛋白质组学分析，脓毒症、SIRS组、健康对照组三组唾液中差异表达的蛋白共823种。查阅相关文献资料，确定7种目标蛋白：血管性血友病因子（vonWillebrandfactor，VWF）、α-1抗胰糜蛋白酶（Alpha-1-antichymotrypsin，AACT）、C反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A-1（SerumamyloidA-1protein，SAA）、高迁移率族蛋白B1（HighmobilitygroupproteinB1，HMGB1）、基质Gla蛋白（MatrixGlaprotein，MGP）、CD74蛋白（HLA-DR-associatedinvariantchain）。WB结果显示，CRP及AACT在脓毒症组、SIRS组、健康对照组之间有显著性差异，ELISA结果显示，CRP在脓毒症组中表达最高，依次为SIRS组、健康对照组,差异有统计学意义（p＜0.01）,AACT在脓毒症组的表达高于SIRS组（p=0.073），显著高于健康对照组（p＜0.001）。CRP可能是诊断脓毒症的生物标志物。 研究结论 C反应蛋白在脓毒症组、SIRS组、健康对照组的唾液中表达具有显著性差异，可能是潜在的诊断脓毒症的生物标志物，有望作为一种无创的方式协助早期发现脓毒症。
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