摘要
目的： 本研究通过高脂饮食喂养GK大鼠建立糖尿病大血管病变（胸主动脉病变）模型，以Notch信号通路介导的Th17/Treg细胞免疫平衡为方向，基于“正虚邪伏-代谢记忆-大血管损伤”理论认识体系，探讨养阴益气活血之参芪复方通过调控免疫平衡介导的炎症反应，从而改善血管区域免疫炎症微环境紊乱，为临床早期抑制代谢记忆保护大血管提供实验依据，拓展糖尿病大血管病变临床防治思路。 方法： 高脂饲料持续喂养4周，建立糖尿病大血管病变（胸主动脉病变）模型。造模结束后随机分为模型组(M)、二甲双胍组(W)、参芪低(SQ-L)、中(SQ-M)、高(SQ-H)剂量组，另设Wistar大鼠作为对照组(C)，每组各8只，干预周期为12周(84天)。观察各组大鼠一般情况、血糖、血脂、胰岛素抵抗水平；HE染色法观察胸主动脉病理形态、Tunel免疫荧光染色法观察胸主动脉内皮细胞凋亡情况、酶联免疫吸附法（Elisa）检测血清一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）评价胸主动脉造模效果；流式细胞术(FCM)检测脾脏辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平；免疫组化法（IHC）检测胸主动脉Treg细胞、白介素-10(IL-10)、Th17细胞、白介素-17A(IL-17A)阳性表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Notch1、叉头翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)、视黄酸相关孤儿受体ROR-γtmRNA表达；蛋白免疫印迹（Westernblot）检测胸主动脉Notch1、Hes1、Foxp3、ROR-γt蛋白表达；Elisa检测血清IL-17A、IL-10水平。 结果： 1.与正常组相比，模型组显示胸主动脉内皮细胞结构受损，凋亡率增加，并伴有内皮功能紊乱（NO降低，ET-1升高），表明成功构建2型糖尿病大鼠胸主动脉病变模型。模型组大鼠一般状态较差，血糖血脂代谢水平紊乱，存在胰岛素抵抗。模型组大鼠体内存在Th17/Treg免疫反应异常，表现为脾脏Treg细胞明显降低，Th17细胞明显升高，血清IL-10和IL-17A水平均降低。同时胸主动脉Foxp3表达降低，Treg细胞及IL-10阳性表达均减少；胸主动脉ROR-γt升高，Th17细胞及IL-17A阳性表达增多，存在血管区域微环境的免疫炎症紊乱。胸主动脉Notch1mRNA和Notch1、hes1蛋白表达水平均升高。 2.与模型组相比，各干预组大鼠活动状态明显恢复，血糖血脂水平逐渐改善，胰岛素抵抗减轻，胸主动脉内皮细胞和功能在一定程度上得以修复。参芪复方可恢复大鼠体内Th17/Treg免疫平衡，恢复机体抗炎-促炎动态平衡（血清IL-17A、IL-10水平均升高）。通过降低Nocth1/Hes1表达调节Th17/Treg细胞分化平衡，使胸主动脉Foxp3表达升高，抑制ROR-γt表达，增加Treg细胞及IL-10阳性表达，减少Th17细胞及IL-17A阳性表达，从而减缓血管内皮免疫炎症反应发展。 结论： 1.参芪复方能够改善大鼠一般情况，调节糖脂代谢紊乱，减轻胰岛素抵抗水平，在一定程度上修复胸主动脉内皮细胞结构损伤和降低内皮细胞凋亡率，并改善血管内皮功能障碍。 2.参芪复方可改善大鼠体内Th17/Treg免疫异常反应，恢复抗炎（IL-10）-促炎(IL-17A）动态平衡，并通过增加胸主动脉内源性保护因子Treg细胞水平和IL-10表达，降低胸主动脉Th17细胞水平和IL-17A表达，改善血管区域Th17/Treg细胞失衡从而有效促进大血管保护性免疫反应，全面恢复血管区域免疫炎症微环境稳态。 3.参芪复方可能是通过抑制Notch1/Hes1通路激活调控Th17/Treg细胞免疫失衡，从而改善血管区域免疫炎症微环境来发挥保护胸主动脉病变的作用。
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