摘要
目的:研究铁死亡诱导剂Erastin对多西紫杉醇（docetaxel，Doc）耐药前列腺癌敏感性的影响，并通过体外实验及体内实验探究可能的分子机制。 方法：（1）用浓度递增法构建对Doc耐药的PC3和DU145前列腺癌细胞株，CCK-8和细胞克隆实验检测前列腺癌细胞对Doc的抗性。 （2）在PC3和DU145的亲本细胞株和耐药细胞株中，Westernblot和实时荧光定量PCR检测铁死亡相关分子TFR1、XCT、FTH1表达量,铁离子比色法检测铁离子表达水平，流式细胞术检测活性氧（ROS）含量。 （3）Erastin处理PC3和DU145的亲本细胞株和耐药细胞株，CCK-8检测细胞活力以及加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）后细胞活力变化。 （4）不同浓度Erastin和Doc处理PC3和DU145的亲本细胞株和耐药细胞株，CCK-8检测细胞活力,Compusyn分析Doc与Erastin联合处理后CI值。 （5）Erastin与Doc单药处理和联合处理PC3和DU145的耐药细胞株，Westernblot检测铁死亡相关蛋白TFR1、XCT、FTH1表达量，铁离子比色法检测铁离子表达水平。 （6）Erastin与Doc单药处理和联合处理PC3和DU145的耐药细胞株，Westernblot检测凋亡相关蛋白PARP、Caspase9、CleavedCaspase-9、Caspase3、CleavedCaspase-3、Bcl-2、Bax表达量并通过流式细胞术进一步检测细胞凋亡率。 （7）用不同浓度Erastin处理PC3和DU145的耐药细胞株，Westernblot和免疫荧光分别检测P-GP蛋白量及细胞定位，流式细胞术检测底物Rho123含量。 （8）将PC3耐药细胞株通过皮下注射到裸鼠体内，构建裸鼠异种种植瘤模型，并设置为对照组、Erastin组、Doc组及Erastin+Doc组，记录瘤体体积及最终瘤体重量，并通过免疫组化检测Ki67表达情况。 结果：（1）PC3和DU145耐药细胞株IC50远远高于亲本细胞株,在持续的多西紫杉醇作用下细胞活力未受到明显影响，耐药细胞株构建成功。 （2）与亲本细胞株相比，PC3和DU145耐药细胞株中XCT、FTH1表达上调，TFR1、铁离子水平和活性氧含量下调，耐药细胞株中铁死亡相关因子表达下调。 （3）铁死亡诱导剂Erastin抑制前列腺癌细胞PC3和DU145耐药细胞株活力且加入特异性铁死亡抑制剂Fer-1后可被逆转，Erastin诱导PC3和DU145的耐药细胞株铁死亡。 （4）Erastin与Doc联合处理明显抑制PC3和DU145耐药细胞株生长,CompuSyn分析在PC3和DU145的耐药细胞株中Erastin与Doc发挥协同效应，而在亲本细胞株中无协同效应。 （5）Erastin与Doc联合处理PC3和DU145的耐药细胞株，与Erastin处理组相比，TFR1、XCT、FTH1及铁离子水平并未增加，提示Doc未通过促进Erastin诱导的铁死亡发挥效应。 （6）Erastin与Doc联合处理PC3和DU145的耐药细胞株，与Doc处理组相比，凋亡相关蛋白PARP、Caspase9、Caspase3和Bcl-2表达水平下降，CleavedCaspase-9、CleavedCaspase-3、Bax表达水平升高，细胞凋亡率明显增加，提示Erastin可以通过促进Doc诱导的凋亡发挥协同效应。 （7）与亲本细胞株相比，PC3和DU145的耐药细胞株中ABCB1的表达水平明显增高。在一定浓度范围内，Erastin不改变P-GP的蛋白量及细胞定位但可以抑制ABCB1的底物Rho123的排出，提示Erastin可能通过抑制ABCB1活性增加多西紫杉醇耐药前列腺癌对多西紫杉醇的敏感性。 （8）Erastin与Doc联合处理组瘤体大小及重量明显低于单独药物处理组且Ki67表达明显降低，Erastin与Doc在体内抑制肿瘤生长。 结论：Erastin可在一定程度上增强Doc诱导的细胞凋亡，并通过抑制多药耐药蛋白ABCB1的活性逆转前列腺癌多西紫杉醇耐药。
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