摘要
目的：肾阳虚是由于素体阳虚、年老肾亏、房劳过度、久病伤肾等，使肾阳亏虚，机体失却温煦所表现的证候。现代人群中，中老年男性（年老肾衰）以及性交过频、疲劳过度的青年男性（房劳伤肾）是肾阳虚高发人群。中医药对于肾阳虚的治疗，以“补肾益精”为基本治疗原则。无比山药丸出自《太平惠民和剂局方》，具有“温补肾阳”之功，根据“房劳伤肾”、“年老肾衰”的中医理论，模拟男性“房事不节+劳倦过度”以及“自然衰老”，建立两种拟人化的肾阳虚小鼠。从不同角度考察无比山药丸对两种拟人化肾阳虚小鼠的改善作用及可能机制，以拓展其药理作用和临床应用。 方法：1.无比山药丸对“房事不节+劳倦过度”致肾阳虚小鼠的影响:采用性功能良好的雄性ICR小鼠房事不节（雄雌同笼1∶5）复合劳倦过度（力竭游泳）8周制备肾阳虚小鼠，造模的同时灌胃给予无比山药丸8周。检测以下指标:①行为学:体重、肛温、抓力、自主活动以及尾部微循环血流量;②性行为:捕捉、骑跨和射精行为的潜伏期及次数;③肾功能相关:血清Cr、BUN、UA含量，肾脏SOD、GSH-Px及MDA水平，肾脏组织形态学及细胞凋亡情况;④阴茎勃起功能:阴茎NO、cGMP含量，T-NOS、GC活性以及eNOS和GUCA蛋白表达;⑤精子质量:精子密度、精子活力、精子存活率、精子畸形率、精子ATP水平及精囊精浆果糖含量;⑥睾丸生精功能:血清性激素FSH、HC、T、GnRH及E2水平，睾丸SOD、MDA水平，睾丸组织形态学及细胞凋亡情况，睾丸PCNA、CYP19、TGF-β1蛋白表达;⑦免疫功能:外周血T淋巴细胞及其亚群占比，全血中白细胞、淋巴细胞类及中性粒细胞类等数量及比例。 2.无比山药丸对自然衰老肾阳虚小鼠的影响:采用13～14月龄BALB/c雄性自然衰老小鼠，灌胃给予无比山药丸8周。检测以下指标:①行为学:体表温度、抓力、自主活动、尾部微循环血流量;②性行为:捕捉、骑跨和射精行为的潜伏期及次数;③肾功能相关:血清Cr、BUN、UA含量，肾脏SOD、MDA水平，肾脏组织形态学;④阴茎勃起功能:阴茎NO、cGMP含量，T-NOS、GC活性及eNOS和GUCA蛋白表达;⑤精子质量:精子密度、精子活力、精子存活率、精子畸形率、精子ATP、SDH含量;⑥HPG轴功能:血清性激素T、FSH及E2水平，睾丸组织形态学及超微结构，睾丸CYP19、TGF-β1及PCNA蛋白表达;⑦睾丸组织凋亡:睾丸组织细胞凋亡情况，睾丸SIRT1/3及凋亡因子蛋白及mRNA表达。 结果：1.无比山药丸对“房事不节+劳倦过度”致肾阳虚小鼠的影响:①行为学:无比山药丸能提高肾阳虚小鼠抓力、肛温及自主活动次数，升高尾部微循环血流量。②性行为:缩短捕捉、骑跨及射精潜伏期，增加捕捉、骑跨及射精次数。③肾功能相关:降低血清UA、CR、BUN及肾脏MDA水平，升高SOD及GSH-Px活性，改善肾脏病变并减少细胞凋亡。④阴茎勃起功能:升高阴茎NO、cGMP含量及T-NOS、GC活性，提高阴茎eNOS及GUCA蛋白表达。⑤精子质量:提高精子密度、活力及存活率，降低畸形率,升高精子ATP及精浆果糖含量。⑥睾丸生精功能:升高血清HC、T、GnRH以及E2水平，降低FSH水平;升高睾丸SOD活性，降低MDA含量;改善睾丸病变并减少细胞凋亡;增加睾丸SIRT1、CYP19及PCNA蛋白表达，降低TGF-β1蛋白表达。 2.无比山药丸对自然衰老肾阳虚小鼠的影响:①行为学:无比山药丸能提高肾阳虚小鼠体表温度、抓力、自主活动次数以及尾部微循环血流量。②性行为:缩短捕捉、骑跨及射精潜伏期，增加捕捉、骑跨及射精次数。③肾功能相关:降低血清UA、CR、BUN及肾脏MDA水平，升高SOD活性，改善肾脏病变并减少细胞凋亡。④阴茎勃起功能:升高阴茎NO、cGMP含量及T-NOS、GC活性，提高阴茎eNOS及GUCA蛋白表达。⑤精子质量:提高精子密度、活力及存活率，降低畸形率，升高精子ATP及SDH含量。⑥HPG轴:升高血清T、E2水平，降低FSH水平;改善睾丸病变;增加睾丸CYP19及PCNA蛋白表达，降低TGF-β1蛋白表达。⑦睾丸细胞凋亡:减少睾丸组织细胞凋亡，提高睾丸SIRT1、SIRT3、Bcl-2蛋白及mRNA表达，降低p53、Bax、FOXO3蛋白及mRNA表达。 结论：1.无比山药丸能改善肾阳虚腰膝酸软、畏寒肢冷、性欲减退、精神萎靡等证候，表现为提高肾阳虚小鼠抓力、肛温、尾部微循环血流量及自主活动次数，增强性行为,并能改善肾功能。 2.无比山药丸具有改善肾阳虚性功能障碍和生殖功能低下的作用，表现为通过激活阴茎NO-cGMP途径增强阴茎勃起功能;通过调控SIRT1/3及其下游凋亡相关基因表达抑制睾丸细胞凋亡，维持睾丸生精功能并提高精子质量。
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