摘要
刺山柑是一种具有广泛的药用价值和经济价值的传统中草药。在新疆民间用来治疗类风湿性关节炎、痛风、肩周炎等疾病。现代研究表明，刺山柑含有黄酮类、生物碱、酚酸类及挥发油等化学成分，具有抗炎镇痛、抑菌、抗氧化、保肝、降血糖及降血脂等作用。类风湿性关节炎是一种全身性的自身免疫性疾病，主要表现为侵蚀性、多发性、慢性及系统性等。 在课题组前期研究中，经过动物实验确定了刺山柑果实正丁醇提取物具有抗炎镇痛及抗类风湿性关节炎的作用，但抗类风湿性关节炎的具体作用机制尚不明确。本论文是在以上研究基础上，基于网络药理学与分子对接，开展刺山柑果实正丁醇提取物抗类风湿性关节炎的作用机制研究，为刺山柑果实创新药物的研发提供参考和科学依据。 （1）本文以刺山柑果实为研究材料，先将干燥的刺山柑果实经过醇提、萃取、旋蒸浓缩及干燥得到刺山柑正丁醇提取物，然后对刺山柑正丁醇提取物运用液质联用进行分析，采用硅胶层析柱对刺山柑正丁醇提取物进行分离，得到了单体化合物2-甲基-4-吡喃酮-3-O-芸香糖苷。 （2）将前期得到的液质联用结果与YaTCM数据库进行结合，经筛选得出共同作用的活性成分共80个，包括槲皮素、木犀草素及异鼠李素等，将活性成分与DTT数据库结合进行筛选得到治疗类风湿性关节炎的关键靶点262个，关键靶点包括MMP-1、MMP-9、MMP-13、MAPK14、AKT1、PTGS2等；进行GO富集分析得到1099条生物过程、16条细胞成分、133条分子功能，KEGGPathway富集通路分析得到78条通路。将靶点蛋白-靶点蛋白、活性成分-靶点-GO通路以及活性成分-靶点-KEGG通路进行网络构建，说明刺山柑的活性成分如何发挥作用。 （3）根据网络药理学筛选出合适的活性成分以及靶点蛋白，利用分子对接进行理论验证网络药理学。筛选出槲皮素、木犀草素及异鼠李素三种活性成分与靶点蛋白AKT1、PTGS2、MMP-9、MAPK14四个靶点进行分子对接；发现槲皮素、木犀草素及异鼠李素与AKT1、PTGS2、MMP-9、MAPK14等关键靶点具有较好的结合活性，其中活性成分与MMP-9的对接评分最低，小于-7.0kcal/mol具有强烈的结合活性，说明可以通过刺山柑正丁醇提取物中的活性成分来调节靶点缓解类风湿性关节炎。 （4）MH7A细胞属于类风湿性关节炎成纤维细胞中的一种成熟细胞系，是研究类风湿性关节炎公认的体外细胞模型。利用划痕实验检测不同浓度的刺山柑正丁醇提取物对MH7A细胞迁移能力的影响，实验发现刺山柑正丁醇提取物能抑制MH7A细胞迁移，并采用Westernblot法检测刺山柑正丁醇提取物对MMP-1、MMP-9、MMP-13及P-JNK、P-STAT3信号通路蛋白表达能力的影响。实验发现刺山柑正丁醇提取物可负调控P-JNK、P-STAT3信号通路表达，并抑制MMP-1、MMP-9、MMP-13蛋白表达，具有一定缓解类风湿性关节炎的作用。
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