摘要
目的： 1观察参七解郁颗粒治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病合并焦虑抑郁状态的临床疗效，为其临床应用提供直观量化依据。 2基于网络药理学从分子水平探究参七解郁颗粒治疗动脉粥样硬化性心血管疾病合并焦虑抑郁状态的潜在活性成分及具体药理作用机制。 3基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路探讨参七解郁颗粒治疗慢性心理应激AS小鼠模型的作用机制。 方法： 1参七解郁颗粒治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病合并焦虑抑郁状态的临床观察研究 选取辽宁中医药大学附属医院心内一科收治的80例冠心病不稳定型心绞痛气滞血瘀型患者作为研究对象，研究时限为2020年6月至2022年6月，采用随机数字表法将患者随机分为试验组和对照组，每组各40例。对照组给予西医标准化治疗，试验组在对照组基础上加用参七解郁颗粒，两组患者均连续治疗14天。观察两组患者治疗前后心绞痛分级疗效、心绞痛症状疗效、中医证候疗效、心电图疗效、血脂情况以及焦虑抑郁改善情况。检测两组患者治疗前后血、尿、便常规以及肝功肾功等。 2基于网络药理学探讨参七解郁颗粒治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病合并焦虑抑郁状态的分子机制研究 基于TCMSP数据库结合文献报道筛选参七解郁颗粒药物的有效成分及靶点，并进行基因标准化操作。应用DisGeNET、DurgBank、GeneCards、OMIM、TTD疾病靶点数据库检索AS和焦虑抑郁的疾病靶点。将疾病靶点与药物成分靶点进行映射，上传至STRING数据库进行PPI网络和核心靶点构建。最后利用Metascape数据库进行核心靶点的GO和KEGG信号通路富集分析。 3基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路探讨参七解郁颗粒治疗慢性心理应激AS小鼠模型的作用机制 应用随机数字表法将ApoE-/-小鼠分为AS模型组、AS+CUMS模型组、参七解郁颗粒治疗组和阳性药物对照组，每组各10只，选取高脂饲料喂饲法进行动脉粥样硬化造模，除AS模型组外，其余三组同时给予慢性不可预知温和刺激（CUMS）干预16周。正常对照组选用C57BL/6N型小鼠，给予普通饲料喂养。第9周开始治疗组给予参七解郁颗粒，阳性药物对照组给予辛伐他汀片和圣·约翰草提取物片，其余各组给予等量生理盐水灌胃治疗。通过旷场试验和糖水偏嗜实验观察小鼠行为学变化，利用油红O染色法观察小鼠主动脉内膜的形态学变化，ELISA法检测小鼠血清血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）、炎症因子（IL-1β、IL-18）、应激激素（ACTH、CORT）及5-HT含量，并应用Western blot以及rt-PCR法检测小鼠AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关因子蛋白含量及mRNA表达变化。 结果： 1参七解郁颗粒治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病合并焦虑抑郁状态的临床观察研究 两组患者在性别、年龄、合并其他疾病等方面比较显示，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗结束后，试验组的心绞痛分级疗效和心绞痛积分疗效为86.49％和89.18％，明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗结束后，试验组中医证候疗效改善总有效率达91.89％，心电图疗效总有效率为51.35％，均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗结束后，试验组焦虑症状改善总有效率达86.49％，远远高于对照组23.68％(P＜0.05)，抑郁症状改善总有效率94.59％，明显高于对照组7.89％(P＜0.05)，由此可见，应用参七解郁颗粒对患者焦虑抑郁状况改善显著。 2基于网络药理学探讨参七解郁颗粒治疗动脉粥样硬化性心血管疾病合并焦虑抑郁状态的分子机制研究 2.1参七解郁颗粒药物活性成分234个，主要包括槲皮素、木犀草素、谷甾醇、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、人参皂苷RH2、黄芩苷、汉黄芩素、8-异戊烯基山奈酚、丹参酮ⅡA、二氢丹参内酯、四氢丹参酮、川陈皮素、4-亚甲丹参新酮、异隐丹参酮、隐丹参酮、新隐丹参酮Ⅱ、甘露醇等，预测靶标307个；DisGeNET、DurgBank、GeneCards、OMIM、TTD数据库共筛选动脉粥样硬化性心血管疾病合并焦虑抑郁靶点90个；PPI网络构建后得出关键靶点基因51个，包括mTOR、CYP3A4、HTR3A、AMPK、CASP3、SLC6A4、MAOB等。 2.2GO分析筛选条目共308条,其中BP分支208条，主要包括血液循环、腺苷酸环化酶调节G蛋白偶联受体信号通路、有机羟基化合物代谢、单原子离子传输的调节、缺氧反应、膜电位的调节、肌肉收缩、有机环状化合物分解代谢、突触后膜电位的调节等；MF分支53条，主要包括调控神经递质受体活性、单原子阳离子跨膜转运体活性、蛋白激酶活性等；CC分支47条，主要涉及突触膜、血清素受体复合体、蛋白激酶复合物、细胞器外膜、转录抑制复合物、基底外侧质膜、神经元致密核心囊泡等。 2.3KEGG分析参七解郁颗粒干预动脉粥样硬化性心血管疾病合并焦虑抑郁的信号通路主要包括神经活性配体-受体相互作用通路、脂质和动脉粥样硬化、AMPK信号通路、脂肪细胞分解调节通路等95条。 3参七解郁颗粒抗慢性心理应激AS小鼠模型的作用机制研究 3.1行为学变化 旷场实验结果表明：与正常对照组比较，AS模型组小鼠活动总路程和静止时间占比没有显著的变化（P＞0.05），回形四周区进入次数显著减少（P＜0.01）；与正常对照组和AS模型组比较，给予CUM的三组小鼠箱子内活动的总路程显著减少（P＜0.01），回形四周区进入次数也显著减少（P＜0.01），静止时间所占比例显著上升（P＜0.01）；与AS+CUMS模型组比较，阳性药物对照组和参七解郁颗粒治疗组小鼠活动的总路程增加、回形四周区进入次数增加（P＜0.01），静止时间所占比例降低（P＜0.01），但阳性药物对照组和参七解郁颗粒治疗组比较无明显差异（P＞0.05）。 3.2主动脉形态学变化 油红O染色结果显示：与正常对照组相比，AS模型组与AS+CUMS模型组脂质表达明显增加，且AS+CUMS模型组增加明显。与AS模型组和AS+CUMS模型组相比，阳性药物对照组和参七解郁颗粒治疗组脂质表达减少 3.3血清学检测 血脂结果显示：与正常对照组比较，AS模型组与AS+CUMS模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均增加而HDL-C含量降低（P＜0.01）；AS+CUMS模型组小鼠血清TC（P＜0.05）、TG（P＜0.05）、LDL-C（P＜0.01）含量较AS模型组增高明显，HDL-C降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）；与AS+CUMS模型组比较，参七解郁颗粒治疗组与阳性药物对照组TC、TG、LDL-C含量降低（P＜0.01），HDL-C含量增加（P＜0.01），且阳性药物对照组HDL-C升高大于参七解郁颗粒治疗组（P＜0.01）。 炎症因子结果显示：与正常对照组比较，AS模型组与AS+CUMS模型组小鼠血清IL-1β、IL-18含量均增加（P＜0.01），且AS+CUMS模型组小鼠血清IL-1β、IL-18含量较AS模型组增高（P＜0.05）；与AS+CUMS模型组比较，阳性药物对照组与参七解郁颗粒治疗组IL-1β、IL-18含量降低（P＜0.01），且阳性药物对照组含量低于参七解郁颗粒治疗组（P＜0.05）。 3.4AMPK/mTOR/ULK1信号通路以及Beclin-1、LC3、P62中蛋白含量表达 主动脉组织检测结果显示：与正常对照组比较，AS模型组与AS+CUMS模型组p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值显著下降（P＜0.01），p-mTOR/mTOR比值显著上升（P＜0.01）；与AS模型组比较，AS+CUMS模型组主动脉组织中p-AMPK/AMPK（P＜0.01）、p-ULK1/ULK1（P＜0.05）比值下降，p-mTOR/mTOR比值上升，但差异无统计学意义（P＞0.05），参七解郁颗粒治疗组与阳性药物对照组中p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值显著上升（P＜0.01），p-mTOR/mTOR比值显著下降（P＜0.01）；与AS+CUMS模型组比较，参七解郁颗粒治疗组与阳性药物对照组p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值显著上升（P＜0.01），p-mTOR/mTOR比值显著下降（P＜0.01）。 结论： 1参七解郁颗粒治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病合并焦虑抑郁状态的临床疗效确切，安全可靠，可有效改善患者的心绞痛症状以及患者的焦虑抑郁状态，值得临床进一步推广使用。 2网络药理学研究表明，参七解郁颗粒通过多组分、多途径、多靶点对动脉粥样硬化性心血管病合并焦虑抑郁进行干预，其机制可能与调节神经活性配体-受体相互作用、调控血液循环、自噬功能、脂肪细胞分解调节等生物过程相关。 3动物实验研究表明，参七解郁颗粒能够有效改善AS小鼠慢性心理应激引起的焦虑抑郁样行为，降低血清应激激素及炎症因子水平，改善血脂，减少斑块面积，对动脉粥样硬化的治疗有良好的效果，其机制可能与调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关。
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