摘要
5''端帽是一种普遍存在于真核生物中的具有多种重要生物学功能的mRNA修饰，而真核细胞的mRNA加帽和去帽过程均受调控。细胞周期参与调控细胞生命活动的基本过程，而细胞周期失调可引起癌症等一系列疾病。近年的研究表明，mRNA端帽对细胞周期有重要作用且在细胞周期中受调控，然而mRNA去帽过程在细胞周期中的作用及其机制仍知之甚少。作为核心去帽复合物的主要成分DCP1A,同时在癌细胞中发挥重要作用。本研究以真核生物mRNA去帽因子DCP1A为研究对象，对这些重要科学问题进行了较为深入的研究。 首先，为了研究DCP1A在细胞周期中的作用，我们根据人DCP1A基因的序列设计出三段不同的siRNA干扰序列，为了找出干扰效果最佳的片段，采用Western Blot和qRT-PCR对三段siRNA进行筛选。随后分别使用thymidine-nocodazole(TN)法、胸腺嘧啶双阻滞(D-TdR)法对人宫颈癌细胞(HeLa)同步化，随后在不同的时间段收集细胞，得到G1期、G2/M期、S期以及同步化程度较低的细胞，并使用流式细胞仪对细胞所处时期进行验证。结果显示DCP1A基因的敲降减缓了 TN法同步化HeLa细胞的周期进程，加快了D-TdR法同步化细胞的细胞周期进程。然后为了研究DCP1A基因如何影响细胞周期，使用Western blot技术和qRT-PCR技术检测了不同细胞时期HeLa细胞中的四种细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)的蛋白质和mRNA的含量，结果显示，DCP1A的敲降使同步化HeLa细胞的上述四种细胞周期蛋白的蛋白质和mRNA含量均发生了显著变化。 总体来说，DCP1A的敲降对HeLa细胞的细胞周期和细胞周期蛋白的表达水平产生影响，表明去帽因子DCP1A参与调控细胞周期，而且通过改变细胞周期蛋白的含量来影响细胞周期的进程。
NETL