摘要
研究目的: 1.通过比较正常高值血压痰湿壅盛证大鼠莱菔子干预前后的血清谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C),以及大鼠肝脏组织结构、细胞形态改变及炎症、坏死状况，评价莱菔子对模型大鼠肝脏的保护作用。 2.通过比较正常高值血压痰湿壅盛证大鼠莱菔子干预前后的肝脏chemerin、趋化因子样受体 1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、成纤维细胞生长因子 15(Fibroblast growth factor 15,FGF15)、成纤维细胞生长因子受体 4(Fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)与回肠法尼醇受体(Farnesoid X receptor,FXR)、回肠 FGF15蛋白表达水平，血清TNF-α、IL-6水平，探讨莱菔子对模型大鼠肝脏保护作用的机制。 研究方法: 健康雄性Wistar大鼠60只，随机分为正常高值血压痰湿壅盛证组(n=45)与空白组(n=15)。其中模型组以高脂饲料喂养，不做饮食量限制;空白组按正常高值血压痰湿壅盛证大鼠平均饮食量每日定量给予普通饲料，不做其他处理。8周后，正常高值血压痰湿壅盛证组按照每天7.625mg/kg的剂量，腹腔注射L-NNA溶液，空白组大鼠腹腔注射等量生理盐水，连续注射3周，每周2次。整个造模过程随时观测大鼠一般状况、血压、血脂、肝功能、炎症指标以及肝脏形态结构改变。其中符合纳入标准的正常高值血压痰湿壅盛证大鼠随机分为3组:模型组(n=15)、莱菔子组(n=15)与水飞蓟宾组(n=15),其中莱菔子组根据大鼠体重按照2.5 g/kg的剂量每日灌胃1次。水飞蓟宾组根据大鼠体重按照20 mg/kg的剂量每日灌胃1次。模型组与空白组给予等量生理盐水灌胃处理。 观察并记录各组大鼠毛发光泽，活动状态，饮食，大便等方面变化，给药6周后腹主动脉取血并摘取肝脏，在全自动生化分析仪中检测大鼠血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C。HE染色制作大鼠肝脏组织病理切片，观察大鼠肝脏组织结构、细胞形态改变及炎症、坏死状况。Western Blot检测大鼠肝脏组织chemerin、CMKLR1、TNF-α、IL-6、FGF15、FGFR4与回肠FXR、FGF15蛋白表达水平。ELISA检测大鼠血清TNF-α、IL-6水平。 研究结果: 一般状况:空白组大鼠状态良好，活泼好动，反应灵敏，毛色柔顺光泽，饮食和排便正常。模型组大鼠行动迟缓，毛色暗淡，食量下降，活动量减少，饮水量下降,大便不成形。与模型组比较，莱菔子组和水飞蓟宾组大鼠一般状况有所改善。 生化指标:与空白组相比，模型组大鼠血清AST与ALT水平显著升高（P＜0.0001）;与模型组相比，莱菔子组血清AST、ALT水平显著降低（P＜0.0001）。与空白组相比，模型组大鼠血清TG水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比，莱菔子组大鼠血清TG水平显著降低（P＜0.001）。与空白组相比，模型组大鼠血清TC水平显著升高（P＜0.001）;与模型组相比，莱菔子组大鼠血清TC水平显著降低（P＜0.0001）。与空白组相比，模型组大鼠血清LDL-C水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比，莱菔子组大鼠血清LDL-C水平显著降低（P＜0.01）。 HE染色:与空白组相比，模型组大鼠肝脏细胞肿胀变形，细胞质中出现大量大小不等的脂滴空泡，部分区域出现炎性细胞浸润，有点片状、碎屑样坏死。与模型组相比，莱菔子组大鼠肝脏细胞排列整齐，脂肪空泡已经消失，炎性细胞浸润减少，点片状、碎屑样坏死减少，水飞蓟宾组大鼠肝脏细胞脂肪空泡显著减少，但仍有大量点片状、碎屑样坏死，细胞排列较为疏散。 Western Blot检测:（1）与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织中的chemerin蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比，莱菔子组大鼠肝脏组织中的chemerin蛋白表达降低（P＜0.05）。与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织中的CMKLR1蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比，莱菔子组大鼠肝脏组织中的CMKLR1蛋白表达明显降低（P＜0.01）。与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织中的IL-6蛋白表达显著升高（P＜0.0001）;与模型组相比，莱菔子组大鼠肝脏组织中的IL-6蛋白表达明显降低（P＜0.0001）。与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织中的TNF-α蛋白表达显著升高（P＜0.01）;与模型组相比，莱菔子组大鼠肝脏组织中的TNF-α蛋白表达降低（P＜0.05）。（2）模型组大鼠回肠FXR蛋白表达显著低于空白组（P＜0.0001）;莱菔子组大鼠回肠FXR蛋白表达明显高于模型组（P＜0.0001）。模型组大鼠回肠FGF15蛋白表达显著低于空白组（P＜0.0001）;莱菔子组大鼠回肠FGF15蛋白表达明显高于模型组（P＜0.0001）。模型组大鼠肝脏FGF15蛋白表达显著低于空白组（P＜0.0001）;莱菔子组大鼠肝脏FGF15蛋白表达明显高于模型组（P＜0.001）。模型组大鼠肝脏FGFR4蛋白表达显著低于空白组;莱菔子组大鼠肝脏FGFR4蛋白表达明显高于模型组（P＜0.01）。 ELISA检测:与空白组相比，模型组大鼠血清TNF-α水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比，莱菔子组大鼠血清TNF-α水平显著降低（P＜0.01）。与空白组相比,模型组大鼠血清IL-6水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比，莱菔子组大鼠血清IL-6水平显著降低（P＜0.0001）。 研究结论: 1.莱菔子可以显著降低正常高值血压痰湿壅盛证大鼠血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C水平，明显改善大鼠肝脏损伤状况，对正常高值血压痰湿壅盛证大鼠肝脏具有保护作用。 2.莱菔子可以降低肝脏组织chemerin、CMKLR1、TNF-α、IL-6蛋白表达水平，莱菔子可能通过降低chemerin、CMKLR1水平，抑制肝脏库普弗细胞（Kupffer cell,KC）激活，减少释放TNF-α、IL-6,缓解肝内的炎性反应，抑制肝脏脂肪变性并抑制肝脏胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）的发生发展，从而对肝脏起到保护作用。 3.莱菔子可能通过调节肠道菌群，恢复其对修饰肠道胆汁酸（bile acid,BA）分子的修饰，从而激活FXR,诱导FGF15表达，导致肝肠循环中FGF15水平升高，肝细胞中FGF15与FGFR4结合增加激活FGFR4信号通路，从而抑制BA合成，减少肝脏损伤。
NETL