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基于VEGFR2/PI3K/AKT信号通路研究双氢青蒿素治疗特发性肺纤维化的分子机制
甘文帆1
作者信息
摘要
目的： 利用网络药理学和细胞学方法研究双氢青蒿素治疗特发性肺纤维化的作用机制。 方法： （1）网络药理学：从数据库预测DHA作用靶点和IPF相关靶点，将DHA与IPF靶点取交集，获得DHA治疗IPF的潜在靶点。构建蛋白质互作网络，筛选核心作用靶点。用DAVID数据库分析核心靶点，进行GO和KEGG通路富集分析。最后运用GEO基因差异分析验证筛选出的核心靶点，采用分子对接的方法来分析核心作用靶点和DHA的结合能力。 （2）细胞学实验：用TGF-β1诱导NIH3T3细胞构建IPF体外模型。采用CCK-8法测定DHA（1μM，5μM，10μM，20μM，30μM）对NIH3T3细胞的毒性，以此来确定DHA对NIH3T3细胞的最大无毒浓度。CCK-8法测定不同浓度的TGF-β1（1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）对NIH3T3细胞活性的影响，用以确定最佳诱导浓度。CCK-8法测定DHA对TGF-β1诱导的NIH3T3细胞增殖的影响。免疫蛋白印迹测定DHA对PCNA、Cyclin D1蛋白表达的影响分析DHA对NIH3T3细胞增殖的影响，免疫蛋白印迹测定DHA对α-SMA蛋白表达的影响分析 DHA 对 NIH3T3 细胞分化的影响。用免疫蛋白印迹测定 DHA对VEGFR2、PI3K p85 alpha、AKT1蛋白表达的影响。 结果： （1）本研究通过DHA的靶点和IPF的靶点共同筛选出80个交集靶点，将这些靶点进行GO富集分析得到BP 108项，CC 13项，MF 16项结果。KEGG通路共84条，包括TNF、PI3K-AKT、VEGF、MAPK等信号通路。通过GEO基因差异分析得到有表达差异的TLR4、MAPK14、MAPK3、MAPK8、MAPK1、AKT1、CYCS、TP53、EGFR、CASP3、PTGS2 这11个核心靶点。分子对接显示筛选出的11个核心靶点与DHA结合能均小于-4.25 kcal·mol-1。 （2）结果表明，DHA的最大无毒浓度为20μM，最小有效浓度为10μM。TGF-β1的最佳诱导浓度为5 ng/ml。与空白对照组相比，模型组PCNA、Cyclin D1、α-SMA、VEGFR2、PI3K p85 alpha、AKT1 蛋白表达升高；模型组相比，DHA （10μM，20μM）组PCNA、Cyclin D1、α-SMA、VEGFR2、PI3K p85 alpha、AKT1蛋白表达降低；与模型组相比，DHA（1μM）组PCNA、Cyclin D1、VEGFR2、PI3K p85 alpha、AKT1蛋白表达无明显变化，α-SMA蛋白表达降低。 结论： 双氢青蒿素可以有效缓解IPF，并且可能是通过调控VEGFR2/PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞的增殖和分化发挥作用的。
关键词
双氢青蒿素/特发性肺纤维化/网络药理学/实验药理学/血管内皮生长因子受体/胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
中医内科学导师
张传涛学位年度
2022学位授予单位
成都中医药大学语种
中文中图分类号
R2