摘要
乳腺癌作为女性恶性肿瘤中最常见的肿瘤之一，其发病率高且不断上升，发病年龄逐渐年轻化，对许多患者及其家庭来说是一个沉重负担。虽然早期诊断治疗的病患存活率较高，但是中晚期病患的治疗效果及预后很差。在目前的治疗手段中，手术仍为主要治疗手段，同时也会面临复发风险；内分泌治疗的患者仍会因耐药导致治疗失败；放射治疗及化学疗法的副作用较大，严重影响患者生活质量。目前研究发现针对乳腺癌的特效药物与治疗方案并不完善，因此，探索乳腺癌的发生发展机制及其中可能存在的治疗靶点，完善治疗方案或发现新的治疗手段是有迫切需求的。 LEF-1和β-catenin作为WNT信号通路的关键因子，人类多种癌症的发生过程都有两者的参与。LEF-1的导致癌症发生的机制主要是通过介导肿瘤生长、分化、侵袭和转移的信号通路发挥作用。细胞间连接能力缺失也与β-catenin结构和功能的改变有关，以至于肿瘤细胞可以发生侵袭浸润和转移。多项研究显示β-catenin、LEF-1在人类乳腺癌中出现基因突变及异常蛋白的表达，对乳腺癌的发生发展发挥重要作用。但LEF-1、β-catenin在乳腺癌肿瘤细胞中的作用及其临床病理特征之间的关系还尚未有明确研究。 目的： 本课题研究基于公共数据库GEPIA2，分析乳腺癌中LEF-1、β-catenin的表达情况，另外，通过细胞实验在体外探索LEF-1、β-catenin在乳腺癌增殖、迁移和侵袭中发挥的作用。同时，通过免疫组化在乳腺癌组织层面，研究LEF-1和β-catenin的表达情况，分析各自与乳腺癌患者的一般临床资料及病理学特征的关系。 方法： 1.GEPIA2数据库中分析在正常乳腺组织和乳腺癌组织之间LEF-1、β-catenin的表达差异情况。 2.提取乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌细胞MDA-MB-231、ZR-75-1、T47D、MCF-7的总RNA，通过qRT-PCR检测LEF-1和β-catenin的表达量。 3.分别构建LEF-1和β-catenin的小分子干扰片段siRNA，并分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231和T47D，qRT-PCR分析LEF-1和β-catenin在MDA-MB-231和T47D中的表达情况。 4.在MDA-MB-231和T47D中构建si-LEF-1和si-β-catenin后，采用一些功能实验（cck-8实验、细胞划痕实验和transwell实验）对LEF-1和β-catenin在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用进行评估。利用qRT-PCR分析下调LEF-1后β-catenin的表达变化和下调β-catenin后LEF-1的表达变化。另外，通过蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)实验检测说明Bcl-2，Bax和Caspase-3在分别下调LEF-1和β-catenin后的表达变化。 5.收集由南昌大学第二附属医院病理诊断的在2019年12月至2020年12月时间段内的60例乳腺癌标本。经过免疫组化染色，所有切片标本均由两位有经验的病理医师判读。最终，统计LEF-1、β-catenin的表达方式之后，分析其与年龄、肿瘤大小、分化程度及分子分型等临床病理特点之间的关系以及二者之间的相关性。 结果： 1.GEPIA2数据库中分析显示，LEF-1和β-catenin在乳腺癌中表达水平显著上调。乳腺癌细胞株中LEF-1和β-catenin的表达高于正常乳腺上皮细胞株。 2.下调乳腺癌细胞株LEF-1、β-catenin的表达水平能减弱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 3.Western blot实验说明，与si-NC组比较，下调乳腺癌细胞株MDA-MB-231和T47D中LEF-1和β-catenin的表达，会导致Bax及Caspase-3蛋白表达增加，相反的，Bcl-2蛋白表达减少。 4.在肿瘤大小≥2cm组中，LEF-1的阳性率为68.7%，比＜2cm组的阳性表达率25%高（P＜0.05），即肿瘤组织越大，LEF-1的阳性表达率越高；在存在淋巴结转移的分组内，LEF-1有78.2%的阳性表达率，相较于不存在淋巴结转移组中的阳性表达率高（P＜0.05）；LEF-1在管腔型、HER2型、三阴性乳腺癌的阳性表达率分别为64.4%（29/45）、11.1%（1/9）、100%（6/6）；在乳腺癌中，LEF-1的表达水平与肿瘤的大小、淋巴结转移及分子分型有关，但与患者年龄、肿瘤病理分级及Ki-67指数等无关。肿瘤大小＜2cm时，β-catenin的阳性率为50%，肿瘤大小≥2cm时，β-catenin的阳性率为87.5%，即肿瘤组织越大，β-catenin表达率越高（P＜0.05）；在乳腺癌中，β-catenin的表达水平与肿瘤的大小有关，但与年龄、肿瘤病理分级、淋巴结转移、Ki-67指数及分子分型等无关。 结论： 1.LEF-1、β-catenin在乳腺癌中高表达。 2.LEF-1、β-catenin可以促进乳腺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭。 3.在乳腺癌组织中，LEF-1的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及分子分型有关，但与年龄、肿瘤病理分级及Ki-67指数等无关；在乳腺癌组织中，β-catenin的表达与肿瘤的大小有关，但与年龄、肿瘤病理分级、淋巴结转移、Ki-67指数及分子分型等无关。
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