摘要
本研究从醉鱼草茎部分离获得1株内生细菌ZJ1，以多种供试植物病原菌为指示菌进行抑菌活性测定，发现均有不同程度的抑制作用。通过对该菌株的抑菌特性、分类地位、发酵条件、代谢物稳定性、抗菌物质种类、促生特性进行系统研究，以期为绿色农药的开发及利用提供新的菌种信息。主要内容如下： 1. 采用四点平板对峙法和生长速率法，测定ZJ1菌株及其发酵液对于10种供试病原真菌的抑菌作用，结果发现醉鱼草内生菌株ZJ1对10种供试病原菌均有一定抑制作用，其中，对桃褐腐病菌（M. fructicola）、番茄灰霉病菌（B. cinerea）、胡萝卜褐腐病菌（L. libanotis）和核桃腐烂病菌（M. Laxa）的抑制率较高。 2. 采用形态学观察、生理生化鉴定并辅以分子生物学鉴定，通过16S rRNA序列比对，ZJ1菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus sp. B-1-30和Bacillus sp. A-3-7B的同源性达100%，亲缘关系最近。可将菌株ZJ1初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。 3. 采用比浊法测定内生细菌ZJ1的的生长曲线，结果发现，菌株ZJ1的菌体生长量呈先迅速增加后衰退的趋势。以单因素对其发酵条件进行优化，经筛选，YSP基础培养基为最佳基础培养液，乳糖为菌株ZJ1的最佳C源，牛肉膏+酵母粉+蛋白胨为最佳N源，28~30℃为最佳发酵温度。通过正交试验，结合其方差分析和成本，选择pH7.0，装液量100/500 mL，接种量1%，转速190 r·min-1，发酵时间72 h为ZJ1菌株的最佳发酵条件。 4. 对ZJ1菌株代谢物的稳定性进行测定，结果发现菌株ZJ1抑菌物质有良好的热稳定性及酸碱稳定性，且对紫外光和自然光照射不敏感，可以耐受较长时间贮存。 5. 对内生细菌ZJ1代谢物的排油性和液滴坍塌特性进行测定，发现其具有排油能力且出现液滴坍塌现象，推测内生细菌ZJ1的代谢物中含有脂肽类化合物。使用中压层析对ZJ1的抗菌物质粗提物进行分离纯化，并使用LC-MS对其进行质谱鉴定，验证后得知菌株ZJ1可产生脂肽类抗菌物质。 6. 利用显微观察及电导率法对供试B. cinerea菌丝生长状态和细胞膜的通透性进行测定，结果发现经菌株ZJ1代谢物处理后，B. cinerea菌丝极少产孢，生长异常，发生断裂；随着处理时间延长，B. cinerea细胞膜通透性增大，渗透物质流出，电导率上升。 7. 通过种子萌发试验和灌根法对ZJ1菌株代谢物对番茄幼苗的促生作用进行测定，结果发现ZJ1菌株发酵液稀释100X时可以提高番茄种子的发芽率、50X时对植株的生长情况和保护酶活性的诱导效果最佳；对番茄果实的离体防效结果显示，ZJ1菌株发酵液也对A. solani有一定的预防作用。
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