摘要
目的: 本研究旨在观察超声引导下针刀治疗退行性颈椎病模型兔颈椎间盘的影像学和组织形态学的改变情况，同时研究其对椎间盘组织PINK1/Parkin信号通路和相关自噬因子p62、LC3-Ⅱ、beclin-1表达的影响，以探讨超声引导下针刀治疗该疾病的作用机制并为其提供实验依据。 方法: 30只6月的新西兰大白兔用随机数字表分为5组，空白对照组、模型组、针刀组、自噬抑制组、自噬诱导组，每组各6只。除空白对照组外的其余4组动物均参照张欣等无创兔退行性颈椎病动物模型的建立方法造模，并于12周后对各组动物分别进行相应干预。针刀组、自噬抑制组、自噬诱导组、每周一次行超声引导下针刀治疗，自噬抑制组同时腹腔注射线粒体自噬抑制剂，自噬诱导组同时腹腔注射线粒体自噬诱导剂的药物,模型组和空白对照组模拟干预动作但不进行针刀干预同时腹腔注射等量0.9％生理盐水。5组兔子均连续干预4周，干预结束后一周各组兔子拍MRI和X线。然后3％戊巴比妥钠（1mL/kg）耳缘静脉麻醉后采集各组兔子的椎间盘组织进行各项指标的检测:经过4％多聚甲醛固定、脱钙、石蜡包埋、切片、脱蜡，水化后进行HE和阿利新蓝染色，封片后行椎间盘组织形态学观察和各组间比较;Westerm blot法检测椎间盘组织中PINK1/Parkin信号通路关键节点PINK1、Parkin、p62、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白水平,RT-PCR技术检测各组椎间盘组织中PINK1、Parkin、p62、LC3-Ⅱ、beclin-1的mRNA表达情况。 结果: 1.椎间盘组织MRI改变情况:与空白对照组相比，模型组、针刀组、自噬抑制组和自噬诱导组的椎间盘信号降低程度不同，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比，针刀组的椎间盘信号显著增加（P＜0.05）,这说明超声引导下针刀治疗能够有效地改善退行性颈椎病。与针刀组相比，自噬抑制组和自噬诱导组的椎间盘信号降低，这提示超声引导下针刀治疗可能是通过调控线粒体自噬发挥治疗退行性颈椎病的作用。 2.椎间盘组织形态学改变情况:与空白对照组相比，模型组、针刀组、自噬抑制组、自噬诱导组均出现不同程度的髓核面积减小、髓核细胞数量减少且形态由梭形退变为椭圆形、髓核和内层纤维环组织向上下软骨终板侵蚀、髓核内Ⅱ型胶原蛋白结构紊乱甚至消失、纤维环出现断裂等椎间盘退变情况。与模型组相比较，针刀组退变程度减轻说明超声引导下针刀治疗退行性颈椎病是有效的。与针刀组相比较，自噬抑制组和自噬诱导组退变程度加重，这说明超声引导下针刀可能是通过调控线粒体自噬发挥治疗退行性颈椎病作用的。 3.椎间盘组织中PINK1、Parkin、p62、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白的表达和mRNA的水平比较结果如下:与空白对照组相比较，模型组PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白的表达水平降低（P＜0.05）,而p62的蛋白表达水平增加（P＜0.01）。与模型组相比较，针刀治疗后PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达水平增加（P＜0.05）,而p62的蛋白表达水平下降（P＜0.01）。同样的,与空白对照组相比较，模型组PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、beclin-1的mRNA表达水平降低（P＜0.05）,而P62的mRNA表达水平增加（P＜0.01）。与模型组相比较，针刀治疗后PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、beclin-1的mRNA表达水平增加（P＜0.05）,而p62的mRNA表达水平下降（P＜0.01）。 结论: 经超声引导下针刀治疗后，退行性颈椎病兔模型的影像学和组织形态学情况得到恢复，并且在分子水平上，椎间盘组织中PINK1、Parkin和自噬相关蛋白p62、LC3-Ⅱ、beclin-1的表达水平均得到了改善。因此，适度增强线粒体自噬功能可能是治疗退行性颈椎病的重要途径之一。
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