马链球菌兽疫亚种hasB基因缺失株对小鼠的致病力及免疫效果评价

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中文摘要：马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ）是引起我国猪链球菌病的主要病原之一。近年来，SEZ在世界范围内的传播不断见诸于报,感染猪只病死率高达50％,对全球养猪业造成巨大的威胁。目前，疫苗免疫是我国预防SEZ感染的主要措施，但现有的疫苗效果不一，而毒株弱化是研制疫苗的有效途径之一。有研究表明，透明质酸荚膜是SEZ的主要毒力因子之一，而hasB基因是其生成的关键调控基因，故本研究推测可以通过敲除SEZ的hasB基因制备有疫苗潜力的弱毒株（ΔhasB）。另外，巨噬细胞在机体清除细菌中发挥至关重要的作用。本研究拟通过巨噬细胞抵御ΔhasB试验评价其毒力，再通过免疫保护相关试验评估ΔhasB对机体抗SEZ的免疫保护效果: （1）ΔhasB显著减轻巨噬细胞焦亡通过黏附和侵袭试验发现，与SEZ野生型菌株（WT）相比，ΔhasB对巨噬细胞的黏附作用和侵袭力均极显著上升（P＜0.01）,预示其更容易被巨噬细胞所吞噬;通过Western blotting等技术发现，与WT相比ΔhasB显著下调巨噬细胞GSDMD、GSDMD-N、caspase-1、IL-1β的表达（P＜0.05）,显著减少 IL-1β和IL-18的分泌（P＜0.05）;上述结果表明，与WT相比，ΔhasB明显减轻巨噬细胞焦亡，预示ΔhasB的毒力显著减弱。（2）ΔhasB可使小鼠产生良好的抗SEZ的免疫保护效果通过ΔhasB干预小鼠试验发现，ΔhasB显著提高小鼠的脾脏指数（P＜0.05）,脾脏和肝脏的载菌量则于14 d内均逐渐归零;通过ΔhasB免疫小鼠试验发现，ΔhasB对SEZ感染小鼠的保护率为100％,使免疫小鼠血清抗体水平显著上升（P＜0.01）;通过全血杀菌试验发现，免疫小鼠血清具有显著的体外杀菌效果（P＜0.05）;通过观察小鼠病理切片发现，使用ΔhasB免疫小鼠可使SEZ对小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肾脏造成的损伤明显减轻。上述结果表明，ΔhasB对小鼠具有良好的安全性，使免疫小鼠产生高水平的抗体,其血清具有良好的体外杀菌效果，对SEZ感染具有良好的免疫保护效果。综上所述，ΔhasB诱导的巨噬细胞焦亡程度显著弱于WT,ΔhasB的致病力显著减弱，并可以使小鼠产生良好的抗SEZ免疫效果，预示ΔhasB有作为预防SEZ感染的新型弱毒活疫苗的潜力。

作者：

杨亚林

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关键词：

猪链球菌病马链球菌兽疫亚种 hasB基因缺失致病力免疫功能

授予学位：

硕士

学科专业：

兽医

导师：

黄云飞

学位年度：

2023

学位授予单位：

佛山科学技术学院

语种：

中文

中图分类号：