摘要
目的：胰腺癌是一个死亡率高、患者预后差的恶性肿瘤，它的致癌详细机制至今仍不明确。阐明胰腺癌的分子机制，并寻找合适的诊断、治疗相关标志物就显得尤为重要。STK3在近年来的研究中被证实参与许多肿瘤细胞功能的调控，但其在胰腺癌中的作用及其内在机制还不清楚。因此，探究STK3对胰腺癌功能的影响及潜在机制，有望为其诊治提供新的思路。 方法：（1）利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、免疫组化(IHC)及免疫荧光(IF)分析胰腺癌与癌旁正常组织中的STK3表达水平差异。 （2）RT-qPCR与蛋白免疫印迹（Westernblot）分析各细胞系中STK3表达水平。 （3）经由TCGA-PAAD数据集，绘制Kaplan-Meier生存图，分析STK3表达量与预后的相关性。 （4）利用ImageProPlus6.0（IPP6）软件对胰腺癌组织免疫组化图片进行定量，分析STK3表达与患者临床病理特征的联系。 （5）DNA甲基化特异性抑制剂地西他滨（DAC）被用来探究STK3在细胞系之间的甲基化程度。 （6）利用过表达慢病毒、短发夹RNA（shRNA）构建过表达、敲减STK3的胰腺癌细胞，CCK-8试验及集落形成试验检测STK3对胰腺癌细胞增殖能力的影响。 （7）使用流式细胞术和免疫荧光分析STK3对胰腺癌细胞凋亡的影响。 （8）Transwell试验用来探究STK3在迁移、侵袭方面对胰腺癌细胞的作用，Westernblot检测STK3对上皮-间质转化（EMT）的常见标志物的影响。 （9）基因集富集分析（GSEA）预测与STK3关系密切的基因集，Westernblot检测STK3对PI3K/AKT/mTOR通路的调控。CCK-8试验、集落形成试验、流式细胞术和Westernblot被用来验证PI3K抑制剂LY294002对敲减STK3造成的影响的逆转作用。 （10）STRING、GeneMANIA在线预测网站预测与STK3可能存在相互作用的分子，GEPIA在线分析网站分析STK3与RASSF1的相关性，CCK-8试验、集落形成试验、流式细胞术和Westernblot检验敲减RASSF1对STK3调控细胞功能的影响。 （11）裸鼠异种移植试验探究STK3在体内环境中对胰腺癌细胞生长的作用。 结果：（1）胰腺癌组织中的STK3表达水平出现下调。 （2）人正常胰腺导管上皮细胞系中STK3表达高于胰腺癌细胞系。 （3）胰腺癌中STK3低表达提示患者预后不良。 （4）胰腺癌组织中的STK3表达量与性别、TNM分期和淋巴转移存在相关性。 （5）胰腺癌各细胞系中STK3甲基化水平相较于人正常胰腺导管上皮细胞系更高。 （6）STK3对胰腺癌细胞的增殖有抑制作用。 （7）STK3促进胰腺癌细胞凋亡。 （8）STK3通过抑制EMT减少胰腺癌细胞迁移、侵袭。 （9）GSEA分析显示STK3与KEGG_PANCREATIC_CANCER,KEGG_MTOR_SIGNALING_PATHWAY和KEGG_APOPTOSIS基因集存在相关性。STK3通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路来促进胰腺癌细胞凋亡和抑制增殖。 （10）预测结果表明RASSF1与STK3可能存在相互作用，且它们的表达存在相关性。RASSF1在STK3调控胰腺癌细胞增殖、凋亡的过程中发挥了重要作用。 （11）STK3在体内抑制胰腺癌生长。 结论：胰腺癌中存在STK3表达下调，且STK3的表达水平与患者预后存在相关性。STK3能够抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进胰腺癌细胞凋亡并抑制增殖，且RASSF1在调控过程中发挥了重要作用。
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