摘要
鸡毒支原体（Mycoplasmagallisepticum,MG）作为禽类主要致病性支原体之一，不仅能够引起鸡慢性呼吸道疾病（Chronicrespiratorydisease,CRD），还能够感染火鸡、鹌鹑、鹅、家雀等其他禽类，广泛流行于世界各地。MG单独感染时多呈隐性感染，一旦鸡群受到各种应激因素刺激或是发生与其他病原的混合感染时，便可造成严重的病理损伤，引起明显的临床症状，给养禽业造成极大危害。目前，MG已广泛流行于中国养禽场，但国内对该类病原的研究起步相对较晚，且现有的各种措施对MG的防控效果均不理想，这给国内养禽业带来较大的防控压力。本研究通过收集不同省份啄壳不全鸡胚样品，进行MG实时荧光定量PCR检测和MG流行株的分离；在此基础上对分离株的mgc2基因及6个管家基因进行测序与遗传进化分析，同时以微量稀释法测定11种抗菌药物对分离株的最小有效抑制浓度；并通过7日龄SPF鸡胚卵黄囊接种试验及15日龄SPF鸡只气管攻毒试验，评估不同分离株的致病性；开展免疫攻毒保护试验，评估不同分离株的免疫原性。研究取得结果如下： 1.鸡毒支原体流行病学调查和药物敏感性试验：2021年5月至2022年8月，本研究共收集到来自广东、广西、湖南、湖北、四川、云南、江苏、安徽、山东和河南10个省份孵化场的1108份啄壳不全鸡胚样品，经检测MG平均阳性率达75.18%，尤以四川和湖南两省最高，可达100.00%；并从上述啄壳不全鸡胚样品中分离到MG流行株41株，挑选其中来自不同孵化场的30株分离株进行mgc2基因及管家基因的测序分析并构建遗传进化树，结果发现分离株与弱毒疫苗株及标准菌株有着较远的遗传距离，以及我国MG流行株基因型的特殊性和多样性特点；最后，根据分离株的颜色变化单位（CCU）及分离地，选出15株分离株进行体外药敏试验，发现泰妙菌素、泰万菌素和多西环素对MG展现出较为明显的抑制效果，而替米考星和吉他霉素的抑制作用较差，耐药性问题突出。 2.鸡毒支原体分离株的致病性试验：通过分离株的SPF鸡胚致病性试验，发现分离株SDTA20220301株和GDCG20210701株对鸡胚致死及造成气囊炎的能力突出，展现出较强的致病性：两组鸡胚死亡率分别为58.62%和46.67%，气囊炎比例分别为41.67%和25.00%；分离株的SPF鸡只攻毒试验结果则显示，AHBZ20220801株能使鸡只出现明显的气囊炎症状，该组鸡只气囊病变平均得分为3.4，明显高于其他组，且该分离株对鸡只体重影响较大：与对照组相比该组鸡只平均增重减少了40.58g。 3.鸡毒支原体分离株的免疫原性筛选与免疫效果评价：选择9株MG分离株配制成灭活苗进行免疫攻毒保护试验，通过检测免疫后抗体水平，以及对攻毒保护能力、呼吸道排毒和器官载量结果进行分析，发现SDTA20220301株免疫原性强、免疫保护效果好，能够使鸡只产生低水平的抗体，并可明显缓解MG对于气囊的侵袭作用：该分离株对鸡只气囊的保护效果达61.54%，可作为潜在疫苗候选株；该分离株对呼吸道的排毒作用影响不明显，但却能显著降低鸡只肺部的MG载量。 本研究主要围绕MG对养禽业的影响，通过流行病学调查及药敏试验结果，证实了目前国内养殖环境面临着MG污染压力大、流行广泛的问题。部分分离株由于长期使用抗生素导致耐药性急剧增强，且具备引起鸡胚啄壳不全及鸡只气囊炎的能力，这对生产环节无疑将是严重的威胁。SDTA20220301株在免疫攻毒保护试验中展现出较为优秀的免疫原性，具备成为灭活疫苗候选株的潜力。本研究针对MG的流行病学、病原特性、致病性与耐药性、以及疫苗株筛选及其免疫效果评价等方面进行探究，可为MG病原的基础研究及防控措施的制定提供理论依据和技术支撑。
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