摘要
酒精性肝损伤，又称酒精性肝病（alcoholicliverdisease，ALD）是全国乃至世界范围内的重大健康问题，主要由过量酒精摄入导致肝脏氧化应激损伤和免疫损伤，同时酒精及其代谢产物破坏肠道健康并通过“肠-肝轴”对肝脏造成“二次打击”的过程被认为在ALD的发生中起到关键作用。目前并无防治ALD的高安全性特效药物，然而中医药尤其是药食同源中药表现出拮抗ALD的良好效果，若科学配伍组方可实现在日常食养中防治ALD。 目的： 在中医理论指导下配伍药食同源中药复方（简称复方），探究其防治ALD的作用及机制，为发展中医药食养服务、防治ALD提供理论依据。 方法： 1.防治ALD的药食同源中药复方拟定。 利用中医传承计算平台挖掘《中华医典》中防治ALD的古方数据，分析古代中医药防治ALD的处方用药规律，在此基础上运用中医理论配伍拟定复方。 2.药食同源中药复方防治大鼠ALD的作用及机制研究。 采用梯度酒精灌胃法建立ALD大鼠模型，同时给予复方干预。从一般体征、血清生化、组织病理角度评价复方对ALD大鼠肝脏和肠道的保护作用。从肠黏膜屏障功能和脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）/Toll样受体（toll-likereceptor，TLR）4通路探究复方防治ALD的机制与“肠-肝轴”的相关性。 3.药食同源中药复方对ALD大鼠肠道微生物的影响。 对ALD大鼠的盲肠内容物进行生物信息统计分析，根据菌群生物多样性、菌群结构、生化指标相关性和功能预测等分析，从肠道生物屏障角度进一步探究复方防治ALD的机制与“肠-肝轴”的相关性。 结果： 1.防治ALD的药食同源中药复方拟定。 （1）筛选得到处方240首，含中药189味，主要为补虚类、理气类和利水渗湿类，用药归经多属脾、胃、肺经，药性总属温、寒、平性，药味总属辛、苦、温味。关联分析得到30对高频药物组合和28条关联规则。聚类分析得到类方1amp;nbsp;大黄-栀子-甘草-黄芩-茵陈，类方2白术-茯苓-葛根-陈皮-人参和类方3葛根-葛花-陈皮-甘草-砂仁。 （2）类方2、3与东垣葛花解酲汤组成高度吻合，拟结合二者配伍组方，用于ALD的预防与治疗。拟定复方：葛根15g，茯苓15g，砂仁10g，陈皮10g，党参10g，干姜6g。 2.药食同源中药复方防治大鼠ALD的作用及机制研究。 （1）一般体征：复方能改善ALD大鼠毛发枯黄、精神萎靡、反应迟缓、便溏尿黄、不欲饮水、频繁抓毛以及出现醉酒态等症状。 （2）血清生化：与正常组比较，模型组大鼠白细胞（whitebloodcell，WBC）、淋巴细胞数目（lymphocytenumber，Lymph#）、单核细胞数目（mono-cytenumber，Mon#）显著升高（Plt;0.01），血清丙氨酸氨基转移酶（alaninetransaminase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartatetransaminase，AST）、总胆固醇（totalcholesterol，TC）和肝脏丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量升高（Plt;0.05）。与模型组比较，复方高剂量组WBC、Lymph#减少（Plt;0.05），复方低剂量组血清TC、中剂量组血清AST、高剂量组血清ALT、AST显著下降（Plt;0.01）。 （3）病理形态：模型组大鼠肝脏见炎性细胞浸润，肝索错乱，局部水肿、细胞核消失，有大量红色脂滴，回肠内壁肠绒毛矮小、局部萎缩脱落。复方高剂量组大鼠肝脏的炎性细胞浸润和红色脂滴减少，肠绒毛结构完整、排列密集，接近正常组大鼠组织形态。 （4）乙醇代谢酶：与正常组比较，模型组大鼠血清乙醛脱氢酶（acetalde-hydedehydrogenase，ALDH）浓度降低（Plt;0.05）。与模型组比较，复方高剂量组的乙醇脱氢酶（alcoholdehydrogenase，ADH）浓度增加（Plt;0.05）。 （5）肠道通透性：与正常组比较，模型组大鼠血清LPS、D-乳酸（D-lacticacid，D-LA）浓度显著升高（Plt;0.001，Plt;0.01），回肠紧密连接组分闭合蛋白（occludin）表达减少。与模型组比较，复方中、高剂量组血清LPS、D-LA浓度下降（均Plt;0.05），回肠occludin蛋白表达增多。 （6）血清炎症因子：与正常组比较，模型组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α）、白介素（interleukin，IL）-6上升，IL-10下降（均Plt;0.05）。与模型组比较，复方中、高剂量组血清TNF-α、IL-6显著下降（均Pamp;nbsp;lt;0.01），IL-10上升（Plt;0.05）。 （7）TLR4通路：与正常组比较，模型组大鼠肝脏TLR4、髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）、核因子κB（nuclearfactorka-ppa-B，NF-κB）p65的蛋白表达量增多（均Plt;0.05）。与模型组比较，复方低剂量组大鼠肝脏NF-κBp65蛋白表达量显著减少（Plt;0.01），中、高剂量组大鼠肝脏TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达量减少（均Plt;0.05、均Plt;0.01）。 3.药食同源中药复方对ALD大鼠肠道微生物的影响。 （1）生物多样性：与正常组比较，模型组的sobs、chao、ace指数极显著减少（均Plt;0.001），shannon指数减少、simpson指数增加（均Plt;0.05）。与模型组比较，复方低剂量组的sobs、shannon指数增加，中剂量组的sobs、chao和ace指数增加，高剂量组的sobs、chao、ace、shannon指数增加（均Plt;0.05）。 （2）门水平菌群结构：与正常组比较，模型组变形杆菌丰度显著下降（Plt;0.01）。与模型组比较，复方低、高剂量组变形杆菌丰度上升（均Plt;0.05），中剂量组变形杆菌、脱铁杆菌丰度显著上升（均Plt;0.01）。 （3）属水平菌群结构：与正常组比较，模型组嗜冷杆菌属丰度显著减少（Plt;0.01）、毛螺菌科_NK4A136_group、Jeotgalicoccus、布劳特氏菌属等丰度减少（均Plt;0.05）。与模型组比较，复方低剂量组普雷沃氏菌科_NK3B31_group丰度显著增加（Plt;0.01）、Colidextribacter、NK4A214_group、瘤胃球菌属等丰度增加（均Plt;0.05），中剂量组脱硫弧菌属等丰度显著增加（Plt;0.01）、UBA1819和厌氧细杆菌属丰度极显著增加（均Plt;0.001），高剂量组norank_f_Muribaculaceae、unclassified_f_Ruminococcaceae丰度显著增加（均Plt;0.01）、脱硫弧菌属等丰度增加（Plt;0.05）。 （4）特异性菌群：正常组是毛螺菌目中的毛螺菌科中的unclassified_f__Lachnospiraceae属和布劳特氏菌属，模型组是Turicibacter属，复方低剂量组是瘤胃菌科和UCG-003属，中剂量组是norank_f__Erysipelotrichaceae属，高剂量组是Muribaculaceae科中的norank_f__Muribaculaceae属。 （5）生化指标相关性：norank_f__Muribaculaceae与AST、LPS、TNF-α负相关，脱硫弧菌属与AST、ALT、TNF-α、IL-1β负相关，norank_f__Oscillospiraceae与ALT负相关，Intestinimonas与TNF-α负相关，普雷沃氏菌科_UCG-003与AST负相关，norank_f_Eubacterium_coprostanoligenes_group与AST负相关，amp;nbsp;葡萄球菌属与D-LA正相关（均Plt;0.05）。 结论： 1.古代中医药防治ALD用药总以补气、理气、解酒、除湿为纲，配伍常见补气药-利水药，补气药-理气药，化湿药-理气药以及功效类似的药物相须为用。结合类方2、3和东垣葛花解酲汤拟定复方：葛根15g，茯苓15g，砂仁10g，陈皮10g，党参10g，干姜6g。 2.复方能够保护ALD大鼠的肝脏和肠道健康，改善ALD大鼠的异常体征和症状，降低血清肝功能和血脂水平，改善肝脏和回肠的病理结构损伤。其机制可能是：①提高ADH浓度，加速乙醇代谢。②增强肠黏膜屏障功能，降低肠通透性，减少内毒素进入肝脏激活TLR4/MyD88/NF-κB通路，进而减少对肝脏的二次打击。 3.复方能够增加ALD大鼠的肠道微生物多样性，复方改善肠黏膜屏障功能和调控肝脏免疫损伤的机制，在门水平上与变形菌门和脱铁菌门相关，但具体机制需要进一步研究，在属水平上与升高norank_f__Muribaculaceae和脱硫弧菌属相对丰度有关。
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