摘要
水牛主要分布在南方，是广西的特色物种之一。研究显示水牛肉含有一定的多不饱和脂肪酸和共轭亚油酸，长期食用对人类的血脂健康有益。CircRNAs是一种非编码RNA，能够通过多种途径调控骨骼肌的生长发育，而circRNAs调控水牛肌肉发育的研究相对较少。基于本课题组前期RNA-seq数据，筛选出黄牛和水牛背最长肌中差异表达的circRNAs。我们最终筛选出差异表达的circCOPS8作为研究对象，并通过构建载体验证circCOPS8对水牛成肌细胞增殖和分化的作用。我们通过对过表达circCOPS8的水牛成肌细胞进行RNA-seq测序，并结合qPCR等实验进一步分析circCOPS8调控水牛成肌细胞的主要的通路以及其可能的作用机制。主要研究结果如下： 1.通过RNase酶消化和qPCR验证了circCOPS8的真实性，并构建circCOPS8的过表达载体。EdU（Plt;0.01）和CCK8（Plt;0.01）试验结果显示circCOPS8显著抑制细胞增殖。通过qPCR和WB检测增殖标志基因的表达量，结果显示PCNA和CyclinD1的表达量显著下降。流式细胞仪检测细胞周期表明circCOPS8显著增加水牛成肌细胞G0/G1期细胞的比例。 2.探究circCOPS8对水牛成肌细胞增殖的作用。WB和qPCR检测结果表明，circCOPS8过表达上调MyoD和MyoG的表达量。细胞免疫荧光试验结果显示过表达circCOPS8后水牛成肌细胞的肌管数量高于对照组。 3.通过构建小鼠肌肉损伤模型验证circCOPS8对小鼠肌肉损伤修复的作用，结果显示circCOPS8抑制小鼠肌肉损伤的修复。通过WB和qPCR检测细胞增殖和分化的标志基因，结果显示circCOPS8可以促进小鼠肌肉的细胞分化并，抑制细胞增殖。通过qPCR进一步检测circCOPS8对水牛成肌细胞和小鼠肌肉细胞的凋亡标志基因的作用，结果显示circCOPS8显著促进水牛成肌细胞和小鼠肌肉细胞的凋亡。 4.通过对过表达circCOPS8的水牛成肌细胞进行RNA-seq测序并通过qPCR验证后，构建差异基因的调控网络，结果显示circCOPS8可以激活抑癌基因从而抑制细胞增殖。RIP-qPCR结果显示circCOPS8可以和IGF2BP3结合抑制细胞增殖（Plt;0.01）。 综上，论文对circCOPS8进行了功能性验证和机制探讨，为circRNAs调控水牛肌肉发育的相关功能和机制研究提供了理论基础。
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