摘要
背景：青光眼是全球首要的不可逆致盲原因。在其各种类型中，原发性开角型青光眼（POAG）占据很大比例。POAG发生发展过程中最主要的危险因素是病理性眼内压升高。眼内压（IOP）受到常规（小梁）流出通路的严格调控，小梁网功能障碍会导致持续性的眼压升高，进而诱发视网膜神经节细胞凋亡和永久性视野丧失。Sonichedgehog（Shh）通路在近年备受关注，Shh信号在眼的形成和发育中起着重要作用，且与眼压的维持和房水的引流有潜在关联。但目前Shh信号通路与POAG中高眼压相关的分子机制尚不清楚。 目的：探究激活Shh信号通路对原代人小梁网细胞（HTMC）的影响及相关机制。 方法：从健康供体眼中分离小梁网组织，组织块贴壁法培养原代HTMC。应用相差显微镜、免疫荧光法和westernblot对细胞进行鉴定。使用重组Shh（rShh）蛋白刺激HTMC诱导Shh信号的激活。应用细胞活力检测法评估rShh对原代HTMC活性的影响，细胞粘附和吞噬检测法评估HTMC的功能改变，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR检测Shh信号诱导的GLI1和SUFUmRNA表达变化，westernblot检测Shh信号诱导的FN、TGF-β2、GLI1和SUFU蛋白表达变化。 结果：小梁网组织块培养7-14天，可见细胞向外生长，经鉴定为HTMC。rShh处理可显著提高原代HTMC的细胞活性，增强细胞粘附和吞噬能力，降低细胞凋亡率，上调FN和TGF-β2蛋白表达。Shh信号在培养的正常HTMC中处于关闭状态，rShh处理能够特异性激活HTMC中的Shh信号通路，通过上调GLI1和下调SUFU的表达向下游传导信号，且Shh信号通路抑制剂cyclopamine预处理可部分阻断这种信号传导。 结论：Shh信号通路可通过GLI1途径调节原代HTMC的活性和功能。调控Shh信号通路可能是缓解POAG中细胞损伤的潜在靶点。
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