摘要
目的： 衰老是一种难以避免的生物进程，是生物体随着自身年龄的增长而出现的各种组织和器官功能的退行性改变。目前人口老龄化问题日趋严重，这给社会和个人都造成了极大的负担。目前有关衰老的机制研究中，自由基理论被广为接受和认可，而许多天然植物被认为是清除自由基的物质来源。桑叶作为我国拥有几千年种植历史的植物资源，具有抗氧化、抗衰老、免疫调节、降血糖等功效。桑叶中的酚类化合物是发挥这些生物学活性作用的主要物质之一，而传统的提取工艺会造成酚类化合物以及其它营养素的大量损失，故使用全桑叶作为原料进行生产加工可能比其提取物更具有价值。本研究旨在通过探究冻干桑叶粉和桑叶乙醇提取物的酚类化合物体外消化、发酵、体内代谢情况，并探究二者的抗衰老活性差别，为全桑叶抗衰老功能食品的开发提供实验数据。 方法： 本研究将探究冻干桑叶粉及其乙醇提取物中的酚类物质在体外模拟胃肠道消化、肠道微生物发酵过程中的变化情况；通过UPLC-Q-ExactiveFocus技术对冻干桑叶粉及其乙醇提取物的酚类物质的入血活性成分进行初步鉴定，并基于入血活性成分进行抗衰老网络药理学研究；使用D-半乳糖构建小鼠加速衰老模型，并用于研究冻干桑叶粉及其乙醇提取物的抗衰老功能。 结果： 1.通过体外模拟消化和肠道微生物发酵模型发现，冻干桑叶粉及其乙醇提取物中的酚类物质含量在胃肠消化过程中逐渐下降；二者中的主要酚类物质的生物可接受率接近，相比桑叶乙醇提取物，冻干桑叶粉经过胃肠消化后能产生更多的酚类物质，酚类物质在肠道微生物的作用下产生丰富的发酵产物。 2.通过UPLC-Q-Exactive-MS/MS技术，对冻干桑叶粉及其乙醇提取物中的酚类物质的体内代谢产物进行初步鉴定，共鉴定出18个相关代谢产物，主要为酚类物质的Ⅰ、Ⅱ相反应产物，包括还原、脱羧、水解、羟基化、脱氧和去糖基化等Ⅰ相反应，Ⅱ相反应如甲基化、葡萄糖醛酸化和硫酸化等；冻干桑叶粉酚类物质在体内释放代谢产物的持续时间比乙醇提取物更长。 3.动物实验研究表明，冻干桑叶粉及其乙醇提取物对衰老小鼠均具有一定的抗衰老作用，二者能不同程度的改善衰老小鼠的体重减轻现象，缓解肝脏病理损伤，提高血液抗氧化能力，提升学习记忆和运动能力；冻干桑叶粉的综合抗衰老效果要优于桑叶乙醇提取物。 4.动物实验研究表明，冻干桑叶粉及其乙醇提取物对衰老小鼠肠道菌群具有一定的改善作用，能够提高衰老小鼠肠道菌群总体的多样性与丰富度，提高拟杆菌门等肠道优势菌群的相对丰度，冻干桑叶粉对肠道菌群的改善作用优于桑叶乙醇提取物。 5.通过网络药理学方法构建“功能成分-靶点-通路”可视化网络系统，并对KEGG富集的相关通路蛋白的表达进行实验验证，结果发现冻干桑叶粉及其乙醇提取物均可能通过调控MAPK信号调节部分蛋白的磷酸化水平，从而达到抗衰老的效果。 结论： 本文比较了冻干桑叶粉及其乙醇提取物中酚类物质在体外消化、肠道微生物发酵和小鼠体内代谢的异同，发现：冻干桑叶粉在体外消化后能产生更多的酚类物质进入结肠发酵过程，并且在体内释放代谢产物的持续时间更长；冻干桑叶粉及其乙醇提取物都具有一定的抗衰老作用；在提高血液抗氧化能力及调节肠道菌群等方面冻干桑叶粉抗衰老功效优于桑叶乙醇提取物。
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