摘要
背景与目的 在我国脑血管疾病现已成为人口死亡的主要原因，其中缺血性脑卒中的发病率及死亡率呈持续上升态势。颈动脉粥样硬化(carotidatherosclerosis,CAS)是引起缺血性脑卒中的主要病理基础，其可造成血管的狭窄、闭塞，易损斑块的突然破裂导致急性动脉阻塞事件的发生。干预CAS的发展进程，促进斑块稳定性是当前防治缺血性脑卒中的重要靶点。目前临床上广泛应用他汀类药物降脂稳定斑块，但同时也可引起横纹肌溶解、新发糖尿病等不良反应。深入探究CAS的发病机制，寻求新的药物防治斑块仍具有现实与临床意义。近年来研究发现，内质网应激通过多靶点参与调控动脉粥样硬化的发生发展，通过抑制内质网应激水平可改善动脉粥样硬化，降低斑块的易损风险。胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glucagon-likepeptide-1receptoragonist,GLP-1RA)作为一类新型降糖药物，不仅能促进胰岛素的合成，还具有改善脂质代谢、保护血管内皮的作用，其对心脑血管的保护作用受到广泛关注。本研究采用GLP-1受体激动剂Exendin-4干预载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠CAS模型，初步探究GLP-1RA处理对小鼠CAS斑块的作用及内质网应激水平的影响。 方法 将ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为Sham组、模型组和GLP-1RA组，8只/组。各组小鼠均给予高脂饲料喂养。高脂喂养6周后模型组、GLP-1RA组小鼠行颈动脉串联结扎以构建颈动脉粥样硬化斑块模型，Sham组小鼠仅分离右侧颈总动脉。再继续高脂喂养6周后，GLP-1RA组给予Exendin-4腹腔注射，30μg/kg/d（依据既往文献及预实验结果选取），余两组分别腹腔注射等量生理盐水，连续干预4周，并于第0周、第1周、第2周、第3周、第4周固定时间点检测各组小鼠空腹血糖及体重情况。给药结束后检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中白介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。留取颈总动脉标本分别用HE染色法观察斑块病理形态改变，天狼星红染色法观察斑块内胶原纤维。免疫组化法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP蛋白）、凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和裂解半胱天冬酶3（Cleaved-caspase3）在颈动脉粥样硬化斑块中的表达情况。 结果 1.小鼠体重变化:干预前各组小鼠体重的差异比较无统计学意义（P＞0.05）;干预3周后，模型组和Sham组小鼠体重较干预前增加（P＜0.05）,GLP-1RA组小鼠体重较干预前比较无统计学意义（P＞0.05）,三组间体重差异比较无统计学意义（P＞0.05）;干预4周后，GLP-1RA组小鼠体重较干预前下降（P＜0.05）,且与Sham组和模型组比较，GLP-1RA组小鼠体重明显下降（P＜0.05）。 2.小鼠空腹血糖变化:不同时间点的差异比较无统计学意义（F=0.302,P＞0.05）,组别与时间不存在交互效应（F=0.418,P＞0.05）;干预期间GLP-1RA组小鼠空腹血糖虽总体呈下降趋势，但与Sham组和模型组比较无统计学意义（P＞0.05）。 3.小鼠血脂水平的比较:Sham组和模型组的TC、LDL-C水平比较无统计学意义（P＞0.05）,与Sham组和模型组比较,GLP-1RA组小鼠血清中TC、LDL-C水平明显下降（均P＜0.05）;三组小鼠血清TG水平差异比较无统计学意义（P＞0.05）。 4.ELISA法检测血清中IL-1β、TNF-α的含量:Sham组与模型组小鼠血清中IL-1β、TNF-α水平差异比较无统计学意义（P＞0.05）,与Sham组和模型组比较，GLP-1RA组IL-1β、TNF-α水平明显下降（均P＜0.05）。 5.HE染色:Sham组小鼠颈动脉血管壁光滑、薄厚均匀，无斑块形成;模型组颈动脉内膜增厚，管腔内几乎填满斑块组织，斑块内可见脂质沉积及胆固醇结晶，大量泡沫细胞及炎症细胞浸润;与模型组比较，GLP-1RA组颈动脉斑块面积变小，脂质沉积、泡沫细胞数目均减少，管腔狭窄程度减轻。 6.天狼星红染色:Sham组小鼠颈动脉胶原纤维呈红色，分布致密、排列整齐;模型组可见颈动脉斑块内胶原纤维分布松散、排列紊乱，部分出现断裂、损伤;与模型组比较，GLP-1RA组颈动脉斑块内胶原纤维相对含量增多（P＜0.05）,胶原纤维间空隙较少、比较完整。 7.免疫组化法检测颈动脉斑块中GRP78、CHOP、Bcl-2、Cleaved-caspase3的表达:与Sham组比较，模型组和GLP-1RA组GRP78、CHOP、Cleaved-caspase3平均光密度值均明显升高（均P＜0.05）,模型组Bcl-2平均光密度值降低（P＜0.05）;与模型组比较，GLP-1RA组GRP78、CHOP、Cleaved-caspase3平均光密度值均有不同程度下降（均P＜0.05）,Bcl-2平均光密度值升高（P＜0.05）。 结论 1.GLP-1RA干预剂量在对血糖不造成明显影响的情况下，可减轻CAS模型小鼠的体重，降低小鼠血清中TC、LDL-C的水平以及炎症因子IL-1β、TNF-α的含量。 2.GLP-1RA干预可减少CAS模型小鼠的颈动脉斑块面积，增加斑块内胶原纤维相对含量。 3.GLP-1RA可能通过抑制内质网应激介导的细胞凋亡来改善颈动脉粥样硬化的进展。
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