摘要
目的 口腔腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）约占唾液腺肿瘤的10%，通常生长缓慢，治疗以手术联合术后辅助化疗为主，手术切除后，手术切除后，发生局部复发和远处转移的可能性较高，患者预后较差。长期死亡率在60%-90%。由于ACC对传统化疗敏感性不高，且毒性反应较重，副作用较大，因此寻找新的治疗药物对改善ACC的疗效具有重要意义。 中医在肿瘤的防治中发挥了其特色优势，目前许多国内外学者倾向于从天然动植物中寻找疗效好、毒性低的治疗药物，从而改善患者预后和生存质量。中医认为口腔癌多与外邪入侵，饮食失节、情志不畅、痰湿聚结、气滞血瘀、气血两虚、功能失调相关，同时病机与心、肝、肾、胃密切相关。《中国药典》中阐述白花丹主要有祛风，散瘀，解毒，杀虫的功效，性味：辛苦涩，温，有毒。入肺、脾、肝三经。而白花丹素（plumbagin，PLB）是从白花丹根叶中提取的天然萘醌衍生物，近来已有研究证明白花丹素具有抗炎、抗微生物、降血脂及抗肿瘤的生物学效应，并且在肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌中发挥明显的抗肿瘤作用，其抗肿瘤机制与细胞凋亡、细胞周期调控、自噬、铁死亡等相关。然而，白花丹及其主要成分白花丹素再口腔腺样囊性癌中是否具有抗肿瘤作用，目前尚未见报道。 因此，本课题以白花丹及其主要成分白花丹素为对象，从体内和体外两个方面，探讨白花丹及其主要成分白花丹素对口腔腺样囊性癌细胞（SACC-83)增殖、迁移和凋亡的影响，并研究其可能存在的机制。 方法 1.体外实验 取涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞进行体外培养，将细胞分为0、12.5、25、50μmol/LPLB组，分别加入含0、12.5、25、50μmol/LPLB的DMSO培养基培养24h。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性；CCK-8实验观察细胞增殖能力；Transwell试验观察细胞迁移能力；TUNEL染色法观察细胞凋亡情况；Westernblotting法检测凋亡相关蛋白表达；荧光探针检测细胞氧化应激及线粒体膜电位水平。 2.体内实验 用浸泡法、水煎法中药传统方法配置白花丹灌胃液，以及使用PLB和玉米油配置浓度为2mg/kg的PLB灌胃液。取30只裸鼠，通过皮下注射1.8×106个SACC-83细胞构建移植瘤模型，待裸鼠成瘤85nm3,将裸鼠分为六组，分别是：对照组（生理盐水），白花丹低浓度组、白花丹中浓度组、白花丹高浓度组、PLB组，用灌胃针对裸鼠进行灌胃处理，每日一次，持续4周。观察并记录裸鼠的体重变化、肿瘤大小及精神状态，计算药物对裸鼠肿瘤的抑瘤率；H-E染色法检测裸鼠心、肝、肺、肾等脏器的病理学特征，评价白花丹及PLB灌胃是否对裸鼠全身器官造成药物损害；免疫组化法检测肿瘤内凋亡相关蛋白Bax表达。 结果 1.体外实验 与对照组相比，12.5、25、50μmol/LPLB可明显抑制腺样囊性癌细胞SACC-83细胞活力，并且显著抑制细胞增殖和迁移，促进细胞凋亡；12.5、25、50μmol/LPLB均增加了凋亡相关通路表达，表现为Bcl-2/Bax比值降低，活性Caspase-3比例升高；25、50μmol/LPLB显著增加细胞内氧化水平，表现为活性氧（activeoxygenspecies，ROS）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）水平升高，线粒体膜电位降低。 2.体内实验 成功建立SACC-83细胞裸鼠移植瘤模型，与对照组相比，低、中、高浓度白花丹灌胃组和PLB灌胃组对裸鼠移植瘤大小均具有明显的抑制作用，且高浓度白花丹抑制作用更明显，而PLB灌胃对肿瘤大小的抑制作用最明显；各组心、肝、肺、肾H-E染色均未见明显病理学改变，提示治疗剂量的白花丹及PLB对裸鼠器官没有明显损害；免疫组化显示，与对照组和中、低浓度白花丹组相比，高浓度白花丹及PLB组中凋亡相关蛋白Bax表达水平更高。 结论 1.体外实验中，白花丹素可抑制腺样囊性癌细胞增殖、迁移，促进肿瘤细胞凋亡； 2.白花丹素可能通过诱导线粒体氧化应激以及ROS介导的细胞凋亡发挥抗肿瘤作用； 3.体内实验中，白花丹及其主要成分白花丹素可抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞凋亡，且通过灌胃途径给与治疗剂量的白花丹及PLB对脏器无明细毒性损害。
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