研究目的 卵巢癌是妇科最致命的恶性肿瘤之一，尤其是高级别浆液性卵巢癌(high-gradeserousovariancancer,HGSOC)。颗粒酶B(GZMB)可以进入靶细胞，激活caspase级联，从而导致DNA断裂，导致快速凋亡。有关GZMB在高级别浆液性卵巢癌预后中的作用尚缺乏相关研究。本研究中拟采用免疫组化学染色方法检测GZMB蛋白在高级别浆液性卵巢癌组织中的表达情况，同时对TCGA公共数据库中的高级别浆液性卵巢癌数据进行分析，探索GZMB基因对高级别浆液性卵巢癌患者生存及预后的影响，评估其是否可作为一个潜在的预后生物标志物。 研究方法 1.采用免疫组化SP染色法检测43例高级别浆液性卵巢癌不同FIGO分期组织中GZMB蛋白的表达情况，并分析此43例高级别浆液性卵巢癌中GZMB的表达与其不同临床病例特征之间的关系。 2.从TCGA数据库中下载高级别浆液性卵巢癌上皮组织及正常卵巢上皮中GZMBmRNA表达水平情况，并运用ROC曲线探讨GZMB基因是否可以用来区分肿瘤组织与正常对照。ROC曲线下面积AUC＞0.5,P＜0.05表示有统计学意义。AUC越接近于1,表明诊断效果越好。 3.从TCGA数据库中下载高级别浆液性卵巢癌患者的数据，分析数据库中GZMB表达与高级别浆液性卵巢癌不同临床病理特征之间的相关性。 4.利用单因素及多因素Cox回归模型分析GZMB表达及不同临床病理特征对高级别浆液性卵巢癌患者预后的影响，分析GZMB是否可以作为高级别浆液性卵巢癌预后的生物标志物。 5.利用Kaplan-Meier法分析GZMB基因表达水平与高级别浆液性卵巢癌患者预后的关系，并制作生存曲线。 6.使用基因本体、京都基因百科全书基因组途径和基因集富集分析分析GZMB相关生物学功能。 研究结果 1.在43例外科手术取得的高级别浆液性卵巢癌组织中，FIGOⅣ期GZMB蛋白阳性表达率明显低于FIGOⅡ、Ⅲ期中的阳性表达率，其GZMB蛋白在FIGOⅡ、Ⅲ、Ⅳ组织中的阳性表达率分别为75.0％、71.4％、11.1％。在这43例高级别浆液性卵巢癌组织中GZMB蛋白阳性表达率与FIGO分期（P=0.003）、组织学分级（P=0.025）及有无淋巴结转移有关（P=0.019）,而与年龄无关（P=0.528）。 2.从TCGA数据库挖掘出了包含高级别浆液性卵巢癌上皮组织及正常卵巢上皮组织的数据集，绘制GZMB用于诊断高级别浆液性卵巢癌的ROC曲线,得到ROC曲线下面积AUC=0.755,P=0.006,具有统计学差异。表明了GZMB具有明显诊断能力来区分肿瘤组织与正常对照。 3.来自TCGA数据库中的415例高级别浆液性卵巢癌组织中GZMB的表达与FIGO分期、组织学分级、有无远处转移及生存状态有关（差异具有统计学意义P＜0.05）,而与年龄无关（P＞0.05）。 4.单因素及多因素Cox生存回归分析模型表明，GZMB低表达、患者诊断年龄大都可能是高级别浆液性卵巢癌的独立危险因素（P＜0.05）,进一步表明GZMB有望成为高级别浆液性卵巢癌预后的分子标志物。 5.Kaplan-Meier生存分析结果显示:与GZMB高表达组的患者相比，低表达组的总生存时间、无病生存期明显缩短。 6.GO分析表明，GZMB参与细胞杀伤、淋巴细胞活化、NF-κB信号的阳性调节、淋巴细胞介导的免疫、B细胞活化、免疫系统的调节过程，对肿瘤坏死因子的反应和凋亡信号通路起负调控作用。 结论 1.GZMB基因的低表达可能是高级别浆液性卵巢癌患者预后的独立危险因素，GZMB有望成为高级别浆液性卵巢癌患者预后的重要分子标志物。2.GZMB可能在高级别浆液性卵巢癌肿瘤微环境中起免疫调节因子的作用，可能是通过抑制肿瘤组织中的免疫反应。
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